细菌总RNA提取试剂盒，可高效、自动地从各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中纯化RNA，搭配赛维尔全自动核酸提取仪 Y-48 最多同时进行48个样本的RNA提取，提取的RNA可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PloyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游分子生物学实验。 规格 磁珠法细菌总RNA提取试剂盒（预封装48T） G3699-48T 48T 产品简介 本产品为48T规格预封装板，利用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪以及自主研发的超顺磁性磁珠在一定缓冲条件下对核酸具有强的可逆吸附作用，被设计用于从各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中同时进行48个样本的RNA提取，整个过程在1 h内完成，可替代当前耗时、繁琐的异丙醇沉淀步骤以及大量的漂洗步骤。DNase中含有可视化染料，具有加样示踪作用，防止DNase漏加，导致提取的RNA中存在基因组DNA残留。提取的RNA完整性好、纯度高、产量大，可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游分子生物学实验。 储存与运输 Lysozyme（50 mg/mL），DTT solution，DNase冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其它试剂室温运输，室温储存，有效期12个月 组成 Component Number Component G3699 - 48 T G3699-1 Lysozyme（50 mg/mL） 500 μL G3699-2 Buffer GRL 15 mL G3699-3 DTT Solution 600 μL G3699-4 DNase 500 µL G3699-5 96孔预封装板 3块 G3699-6 8孔磁棒套 6条 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 检查预封装板是否漏液，如果出现此类现象，请勿使用。 2. 使用前观察磁珠或试剂是否粘在封口膜或试剂预封装板孔壁上，如有此现象可上下混匀后短暂离心或于桌面上轻轻敲击试剂预封装板底部至液滴掉落后再使用。 3. 请自备10 mM Tris-HCl（pH 8.0），用于重悬收集的细菌菌体和稀释Lysozyme。 4. 若提取革兰氏阳性菌RNA，请提前准备37℃的水浴或加热块。 5. Buffer GRL如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 6. 操作前请向Buffer GRL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer GRL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer GRL可在4℃放置一个月。 7. 使用前向预封装板的第4列和第10列孔位的液体（黄色）中加入10 µL DNase（蓝色），加入DNase后液体为绿色。 操作步骤 1. 取1-3 mL菌液 （细菌总量不超过1×10 9 ） ，12,000 rpm （~13,400×g） 4℃离心2 min收集菌体； 注：上清请务必去除干净，否则会影响细菌细胞壁的消化。 注：菌体不宜过量，否则会造成产量降低、基因组残留以及蛋白污染等问题，当OD600=1时建议取1 mL的菌液量。 2. 将菌体重悬于100 μL含Lysozyme的10 mM Tris-HCl （pH 8.0） 中，Lysozyme浓度及孵育条件见下表： 细菌类别 Lysozyme浓度 孵育温度 孵育时间 革兰氏阴性菌（G-） 0.4 mg/mL 室温 3-5 min 革兰氏阳性菌（G+） 5 mg/mL 37℃ 5-10 min 3. 向孵育后的细菌悬液中加入300 μL Buffer GRL （使用前请确认已加入DTT solution） ，涡旋振荡混匀； 4. 预封装板准备：取出深孔板，孔板离心机500 rpm离心1 min或于桌面上轻轻敲击试剂预封装板底部至液滴掉落后再小心撕去铝箔封口膜； 5. 向预封装板的第4列和第10列孔位的液体 （黄色） 中加入10 µL DNase （蓝色） ，加入DNase后液体为绿色； 6. 将第3步的溶液全部转移至预封装板的第1列和第7列孔位； 7. 将预封装板置于核酸提取仪相应的板位上； 8. Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪参数设置： 步骤 1 2 3 4 5 6 7 8 9 工位 3 1 2 3 4 3 5 6 5 等待时间 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:03:00 00:00:00 00:00:00 00:05:00 00:00:00 混合模式 a 2 2 2 2 2 2 2 2 2 混合时间 00:00:10 00:05:00 00:01:00 00:01:00 00:10:00 00:01:00 00:01:00 00:05:00 00:00:10 是否暂停 Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ 吸磁时间 a 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:01:00 00:00:00 体积（µL） 600 500 500 600 100 600 600 80 600 温度（℃） --- 25.0℃ --- --- --- --- --- --- --- a：如果不使用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪，可根据其他适配本产品的仪器说明书调整吸磁时间和混合模式参数。 9. 安装磁套，运行程序； 10. 自动化提取步骤完成后，将第6列和第12列孔位中的核酸溶液小心转移至新的Nuclease-free离心管中，并于-80℃长期保存。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 请勿将预装板倒置。 3. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。 4. 实验时应穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，提取RNA过程中所使用的器具和配制溶液所用的水或试剂请确保为Nuclease-free的制品。 5. 不同细菌细胞壁的酶解难易程度不同，革兰氏阳性菌细胞壁一般较难酶解，客户可根据细菌种类调整溶菌酶浓度和孵育时间。 6. 应使用RNA提取专用操作实验台与电泳设备。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）