蛋白提取
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| YM1012 | 蛋白提取 | 样 | 60 | |
| Y2049-100ML | IP裂解液 | 100 mL | 100 | |
| Y2291-50T | 细胞浆与细胞膜蛋白分离提取试剂盒 | 50 T | 300 | |
| Y3752-50T | 细胞核与细胞浆蛋白分离提取试剂盒 | 50 T | 400 | |
| Y3753-50T | 细胞浆、细胞膜与细胞核蛋白分步提取试剂盒 | 50 T | 500 | |
| Y2203-10ML | WB蛋白拖尾优化试剂 | 10 mL | 350 | |
| Y2017-250UL | 50×Cocktail | 250 μL | 100 | |
| Y2018-1ML | 磷酸化蛋白酶抑制剂 | 1 mL | 45 | |
| Y2019-1ML | PMSF（100mM） | 1 mL | 10 | |
| YT-200-M | 研磨管 2.0mL（无酶） | 500个/袋 | 80 |
1.组织总蛋白提取
准备好所需要数量的研磨管（HT-200-M），加入研磨珠（SYM-03Z），置于冰盒上备用；
Tips：研磨管较普通离心管，管壁进行了加厚处理，不易破损；采用加珠器，无需夹取，使用中全程洁净，减少蛋白降解风险。
组织块先用预冷 PBS（G4202-500ML）洗涤 2-3 次，除去血污，然后放在滤纸上，吸尽多余的 PBS 后放入对应的研磨管中，加入大约 10 倍样本体积的完全裂解液（表1），置于研磨仪（SWE-3D）中，对称放置，确认放置平衡后，盖好盖子，选择程序开始研磨。
表1：完全裂解液组分
| 名称 | 作用 | 货号 | 规格 |
| RIPA裂解液（强） | 快速裂解细胞及组织 | G2002-30ML | 30 mL |
| G2002-100ML | 100 mL | ||
| 50×Cocktail蛋白酶抑制剂 | 抑制各种蛋白酶活性，避免蛋白降解 | G2006-250UL | 250 μL |
| 磷酸化蛋白酶抑制剂 | 抑制磷酸化蛋白酶 | G2007-1ML | 1 mL |
| PMSF（100mM） | 避免蛋白降解 | G2008-1ML | 1 mL |
Tips：完全裂解液能确保从样本中提取蛋白的量和状态。建议提取过程保持低温环境，研磨时采用冷冻研磨仪，减少蛋白质降解和变性。
2. 悬浮细胞蛋白提取
将细胞连带培养基一起吸入 15 mL 离心管（EP-1501-J）中，使用高速低温离心机（SLX-1024F），4℃，2000rpm，离心 5分钟，去掉上清；
Tips：SLX-1024F内仓具有温度传感器，能实时监控温度，使温度保持在设定值，有效避免样本变性和降解。
加入 1mL PBS 溶液（G4202-500ML）重悬细胞，将细胞转移到 1.5mL 离心管（EP-150X-J）中，然后 4℃，2000 rpm，离心 5分钟，去掉上清，保留沉淀，重复此步骤 2-3 次（此步骤目的为清洗细胞中残留的培养基）；
根据细胞沉淀的量加入适量的完全裂解液（表1），例如沉淀体积为绿豆大小（大概 10uL 左右）的加入大约 200μL 完全裂解液，加入适量研磨珠，放入研磨仪进行裂解；
裂解完成后，12000rpm，4℃，离心 10分钟，上清即为总蛋白溶液。
3. 贴壁细胞提取蛋白
倒掉培养基，沿细胞培养皿侧壁或者培养瓶瓶口慢慢加入 PBS 溶液，轻轻晃动平皿或者培养瓶，然后将细胞培养皿/瓶倾斜放置，用移液器（SPIP-1000）轻轻吸除残余液体，尽量轻柔，不要将细胞冲掉，清洗 2-3 次，最后一次将残余 PBS 完全吸干；
加入适当体积的完全裂解液（例如六孔板各单孔细胞长满的话，加入大约 250 μL完全裂解液），反复晃动细胞培养皿/瓶，让裂解液与细胞完全接触，用细胞刮刀（WG3010）将细胞刮下来，收集后，加入研磨珠，放入研磨仪中进行裂解；
裂解完成后，12000rpm，4℃，离心 10分钟，上清即为总蛋白溶液。
RIPA裂解液在裂解过程中，溶液变得粘稠怎么办？
可能原因：
裂解液体积较少组织裂解不充分；
组织或细胞的基因组DNA释放出来变得粘稠。
解决办法：
可以多加RIPA裂解液并用移液器反复吹打至不粘稠；
加入全能核酸酶降解核酸。