封闭孵育

相关产品

货号	名称	规格	价格
Y2036-100ML	一抗稀释液	100 mL	100
Y2020-100ML	Western二抗稀释液	100 mL	100
Y2063-500ML	无蛋白快速封闭液	500 mL	120
YC305021-100g	牛血清白蛋白 BSA 国产	100 g	400
YC305017-100g	牛血清白蛋白 BSA 进口	100 g	950
YB15013-100	Recombinant Anti-GAPDH antibody (Mouse mAb)	100 μL	0
YB15015-100	Recombinant Anti-GAPDH antibody (Rabbit mAb)	100 μL	0
Y9066-1	抗体孵育盒（1格整膜）	1格整膜	15
Y6036-2	抗体孵育盒（2格）	2格	10
Y6083-2	抗体孵育盒（2格避光）	避光 2格	10
Y6037-4	抗体孵育盒（4格）	4格	20
Y6084-4	抗体孵育盒（4格避光）	避光 4格	20
Y9066-4	抗体孵育盒（4格整膜）	4格整膜	50
Y6086-4	抗体孵育盒（4格整膜避光）	避光 4格整膜	50
Y6030-9	抗体孵育盒（9格）	9格	50
Y6031-9	抗体孵育盒（9格避光）	避光 9格	50
YYC-FZ100	钟摆摇床（分体式）	台	2200
YS-3D100	多功能型摇床（水平+钟摆+3D）	台	5000

实验步骤

剪膜标记
待转膜完成，关掉电泳电源，将转膜夹从转印槽中取出，打开转膜夹，左边红色，右边黑色，去掉海绵和滤纸，将膜进行剪角标记，再将膜翻面，转印有蛋白的那一面朝上，放入装有1×TBST 缓冲液（G2150-1L）的抗体孵育盒（G9055-4）中；
Tips1：当对较多的印迹膜进行孵育时，因注意标记区分，避免弄混，且标记应耐受后续实验试剂的漂洗，避免褪色对膜的成像检测结果造成影响，推荐使用载玻片专用记号笔（G6101）。并使用带有数字标记专为WB设计的抗体孵育盒。
洗膜封闭
完成转膜后，用1×TBST洗涤印迹膜1-2分钟；倒掉TBST，加入无蛋白快速封闭液（G2052-500ML），确保封闭液能完全覆盖膜，并将抗体孵育盒置于水平摇床（分体式）（SYC-FP200）上封闭5分钟；
一抗孵育
封闭完成后倒出无蛋白封闭液，用1×TBST清洗印迹膜10秒。使用一抗稀释液（G2025-100ML）稀释一抗，稀释倍数参考对应一抗使用说明书，制成一抗工作液；在印迹膜上加入一抗工作液后，盖上抗体孵育盒盖子，置于水平摇床（分体式）（SYC-FP200）上，放入冰箱过夜孵育。
摇床洗脱
次日，在抗体孵育盒加入 1×TBST，于水平摇床（分体式）（SYC-FP200）上洗脱三次，每次5min；
二抗孵育后洗脱
将二抗用二抗稀释液（G2009-100ML）稀释至说明书建议倍数，在印迹膜上加入二抗工作液后，盖上抗体孵育盒盖子，置于水平摇床（分体式）（SYC-FP200）上，室温下慢摇孵育 30min。用 1×TBST 快速涮洗膜三次。再在抗体孵育盒加入1×TBST，置于摇床上快速洗脱三次，每次 5min。

一抗

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二抗

货号	名称	规格	价格
Y1324-100T	S-vision免疫组化试剂盒（抗小鼠/兔通用二抗）	100 T	380
YB24322	碱性磷酸酶标记的山羊抗小鼠IgG (H+L)	100 μL	120
YB24324	碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG (H+L)	100 μL	120
YB23312	HRP标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	120
YB23313	HRP标记的山羊抗大鼠IgG	100 μL	120
YB23314	HRP标记的山羊抗兔IgG	100 μL	120
YB23415	HRP标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB23215	HRP标记的兔抗山羊IgG	100 μL	120
YB25312	Alexa Fluor 488标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB25314	Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB25415	Alexa Fluor 488标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB28312	Alexa Fluor 594标记山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB28314	Alexa Fluor 594标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB21412	Cy3标记驴抗小鼠IgG	100 μL	280
YB21414	Cy3标记驴抗兔IgG	100 μL	280
YB21415	CY3标记驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB21312	Cy3标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	150
YB21313	Cy3标记山羊抗大鼠IgG	100 μL	150
YB21314	Cy3标记山羊抗兔IgG	100 μL	150
YB27312	Cy5标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB27314	Cy5标记山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB22412	FITC标记的驴抗小鼠IgG	100 μL	280
YB22414	FITC标记的驴抗兔IgG	100 μL	280
YB22415	FITC标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB22312	FITC标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	150
YB22313	FITC标记的山羊抗大鼠IgG	100 μL	150
YB22314	FITC标记的山羊抗兔IgG	100 μL	150
Y1224-100UL	免疫组化专用山羊抗兔二抗	100 μL	300
Y1225-100UL	免疫组化专用山羊抗小鼠二抗	100 μL	300