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实验类型
细胞
硬组织病理
代谢组学/蛋白组学
PCR/核酸电泳
普通组织病理
qPCR
WB
蛋白提取
电泳制胶
WB实验
蛋白定量
封闭孵育
蛋白电泳
蛋白转膜
染胶染膜(可选)
成像检测
WB整体方案
动物
组化/荧光/原位杂交
DMPK
分子克隆
超微病理
生化/ELISA

WB整体方案

样本制备
货号名称规格价格操作
Y2017-250UL50×Cocktail250 μL100
Y2018-1ML磷酸化蛋白酶抑制剂1 mL45
Y2019-1MLPMSF(100mM)1 mL10
YR-2000.5mL/1.5mL/2.0mL 双面板60孔5
YR-150AL1.5/2.0mL金属离心管架60孔25
Y2291-50T细胞浆与细胞膜蛋白分离提取试剂盒50 T300
Y3752-50T细胞核与细胞浆蛋白分离提取试剂盒50 T400
Y3753-50T细胞浆、细胞膜与细胞核蛋白分步提取试剂盒50 T500
Y2203-10MLWB蛋白拖尾优化试剂10 mL350
YT-200-M研磨管 2.0mL(无酶)500个/袋80
YLX-1024F离心机 微量高速低温型26000

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1.1 组织取材

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1.2 配制完全裂解液

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1.3 蛋白提取

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1.4 组织研磨,收集上清

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注意事项

1. 完全裂解液组分推荐配比:RIPA裂解液: 50×Cocktail: PMSF: 磷酸酶抑制剂=100: 2: 1: 1

2. RIPA裂解液在裂解过程中,溶液变得粘稠,可加入全能核酸酶 (G3461-50KU)降解核酸,并用移液器反复吹打至不粘稠

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蛋白定量
货号名称规格价格操作
Y2012-250MLBradford 法蛋白定量检测试剂盒250 mL100

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2.1、选择合适的蛋白定量试剂盒

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2.2、比色测定吸光度值,计算蛋白浓度

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注意事项:

1、可根据下表,选择蛋白定量试剂盒

检测方法BCA法Bradford法
耐受物质高浓度的去垢剂
例如:5%的SDS、5%的Triton
X-100、5%的Tween-20、60、80等
螯合剂或还原剂
例如:1mM的β-巯基乙醇、
5mM的二硫苏糖醇
不耐物质螯合剂和高浓度还原剂
例如:EGTA、DTT、β-巯基乙醇
高浓度的去垢剂
例如:SDS、Triton X-100、
Tween-20、60、80
比色测定波长562 nm595 nm
线性范围50-2000 μg/mL25-1000μg/mL

2、确保样品稀释适当,避免过高的蛋白浓度影响测定结果

制胶
货号名称规格价格操作
Y2204-50T一步法手动梯度PAGE彩色凝胶快速配制试剂盒50 T320
Y2188-50T一步法PAGE彩色凝胶超快速配制试剂盒(10%)50 T120
Y2195-50T一步法免染 PAGE 彩色凝胶超快速配制试剂盒(8%)50 T150
YVE-4-ZJ通用分体式制胶器550
YR-001多彩电泳玻璃板沥水架10
Y2317-104-12% Tris SwePAGE预制胶(11孔)10 片/盒120
Y2192-2.5L自动制胶仪配套试剂盒2.5 L(约260T)248
YVE-V10大通量制胶器2400

1、手动制胶

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2、预制胶


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3、自动制胶

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制样
货号名称规格价格操作
YP-10WB-CWB点样盒装吸头96支/盒20
YMB-MC金属浴(加热制冷振荡型)6500

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配液
货号名称规格价格操作
Y2160-1L1×SWE快速高分辨电泳缓冲液(即用型)1 L(即用型水剂)20
Y4712-500ML实验室专用纯水500 mL15
YF-PC-200012000 mL三角试剂瓶(无酶 单个装)2000 mL(单个装)24
YMS-200A加热磁力搅拌器(智能加热型)3500
Y2159-1L1×免冰浴快速转膜缓冲液(即用型)1 L(即用型水剂)20

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蛋白电泳
货号名称规格价格操作
Y2102-250ULPrestained Protein Marker Ⅹ(10-180 kDa)250 μL160
Y2069-250ULPrestained Protein Marker II (10-200 kDa)250 μL160
Y2098-250ULPrestained Protein Marker Ⅶ (8-195 kDa)250 μL160
Y2094-250ULPrestained Protein Marker Ⅳ (8-200 kDa)250 μL160
Y2100-250ULPrestained Protein Marker Ⅷ (8-270 kDa)250 μL160
Y2096-250ULPrestained Protein Marker Ⅵ (55-320 kDa)250 μL160
Y2101-250ULPrestained Protein Marker Ⅸ (2-40 kDa)250 μL160
Y2097-250ULWestern Protein Marker I (可显影)250 μL160
Y2099-250ULWestern Protein Marker Ⅱ(可显影)250 μL160
Y2200-100ML电泳专用消泡剂100 mL65

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蛋白转膜
货号名称规格价格操作
YSLQPWB专用切胶托盘15
YCD-74WB专用切胶铲30
YVT-NZWB专用镊子10

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封闭
货号名称规格价格操作
Y2063-500ML无蛋白快速封闭液500 mL120
Y6030-9抗体孵育盒(9格)9格50
YS-3D100多功能型摇床(水平+钟摆+3D)5000
Y2161-1L1×TBST缓冲液(即用型)1 L(即用型水剂)20

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抗体孵育
货号名称规格价格操作
Y2036-100ML一抗稀释液100 mL100
Y2020-100MLWestern二抗稀释液100 mL100
YYC-FP200水平摇床(分体式)2200

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成像检测
货号名称规格价格操作
Y2172-200MLECL发光液组合装200 mL400

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染胶染膜 (可选)
货号名称规格价格操作
Y2091-25T蛋白银染试剂盒25 T450
YS-3D100多功能型摇床(水平+钟摆+3D)5000
Y2022-100ML丽春红染色液100 mL100

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注意事项:

1.可根据样本蛋白含量选择蛋白胶染色试剂,考马斯亮蓝染色可检测20ng蛋白,银染可检测低于0.5ng蛋白

2.丽春红对印迹膜染色后,用适当溶液漂洗2-3次,可以进行后续的WB实验


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