平衡透析法血浆蛋白结合率研究

药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一。它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和时间，并往往与药物的相互作用及作用机制等密切相关。研究药物血浆蛋白结合率的方法包括常规的平衡透析法、超滤法、超速离心法、凝胶过滤法、分配平衡法、稳定同位素-GC-MS法、光谱技术等。本SOP规定了采用平衡透析法对药物血浆蛋白结合率进行测定。

　　平衡透析法的基本原理是将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。蛋白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。若系统中自由配基的总量已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋白结合的配基量。根据药物的理化性质及实验室条件，可选择使用一种方法进行至少3个浓度（包括有效浓度）的血浆蛋白结合试验，每个浓度至少重复试验三次，以了解药物的血浆蛋白结合率是否有浓度依赖性。

实验流程：

　　血浆结合孵育-时间采样-上机检测-数据统计

送样运输要求：

　　1、全血样本

　　①样本量200uL，EDTA、EDTA-K2或肝素钠抗凝，4℃保存，冰袋运输，避免剧烈振荡和冷冻结冰。

　　②由于全血常规保存期为7天，如需检测，需要提前至少1周联系实验室确认周期情况，以便沟通协调安排检测。

　　2、血清样本

　　①样本量100uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　3、血浆样本

　　①样本量100uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　4、尿液样本

　　①样本量200uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样品应尽量避免带入粪便残渣。

　　5、动物组织样本

　　①样本量300mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

1、仪器信息

　　2、标准曲线

　　3、总离子流图

　　4、提取离子流图