规格 动物组织/细胞总RNA提取试剂盒 G3640-50T 50T 产品简介 本试剂盒是用于从动物组织和细胞样本中经柱式法提取纯化RNA的广谱型试剂盒。试剂盒采用了特别的裂解缓冲系统，无需苯酚、氯仿等有机试剂抽提，并分别经过gDNA Eraser Spin Column（去除基因组DNA）以及RNA Spin Column（结合RNA），可从5-20 mg的动物组织、10 5 -10 7 新鲜培养的细胞中快速提取高纯度的RNA，整个提取过程仅需30 min即可完成。获得的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、Real Time RT-PCR和构建cDNA文库等各种分子生物学实验。 储存与运输 Proteinase K，DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃储存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3640-50T G3640-1 Buffer RL1 30 mL G3640-2 Buffer RW1 12 mL（使用前加入18 mL无水乙醇） G3640-3 Buffer RW2 20 mL（使用前加入80 mL无水乙醇） G3640-4 DTT Solution 2×0.8 mL G3640-5 Proteinase K 500 μL G3640-6 DNase 250 μL G3640-7 10×DNase Buffer 500 μL G3640-8 Nuclease-free Water 12 mL G3640-9 gDNA Eraser Spin Columns 50套 G3640-10 RNA Spin Columns 50套 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. Buffer RL1，Buffer RW1如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 2. 操作前请向Buffer RL1加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL1加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL1可在4℃放置一个月。 3. 使用前请向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。 4. 按照提取样本量提前配制60%异丙醇（现配现用），如4 mL无酶水（推荐 G4700 ）加入6 mL异丙醇。 5. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。 表1. 不同样本的起始量和裂解Buffer RL1的推荐使用量 样本起始量 裂解Buffer RL1的使用量 贴壁培养细胞（培养皿直径<6 cm） 350 µL 贴壁培养细胞（培养皿直径6-10 cm） 600 µL <5×10 6 的悬浮培养细胞 350 µL 5×10 6 -1×10 7 悬浮培养细胞 600 µL 5-20 mg的动物组织 500 µL 操作步骤 1. 样本裂解： a. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐 G3019 ）保存的动物组织5-20 mg，置于提前装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐 G0203-150G ）和500 μL Buffer RL1（使用前请确认已加入DTT Solution）的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，使用组织研磨仪（推荐 SWE-3D ）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 b. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐 G3019 ）保存的动物组织5-20 mg，置于提前装有500 μL Buffer RL1（使用前请确认已加入DTT Solution）的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，把离心管置于冰浴中使用电动研磨器将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 c. 动物组织：取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液（推荐 G3019 ）保存的动物组织5-20 mg，迅速转移至用液氮提前预冷的研钵中，用研杵研磨组织，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量） ，然后将研磨成粉末的样本转移至含有500 μL的Buffer RL1（使用前请确认已加入DTT Solution）的1.5 mL Nuclease-free的离心管中，反复吹打混匀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 d. 悬浮培养细胞：将悬浮培养的细胞连同培养液一起转移至1.5 mL Nuclease-free离心管中，1,000 rpm离心5 min，收集悬浮培养的细胞，轻轻吸弃上清，向细胞沉淀中加入Buffer RL1（表1中推荐量）（使用前请确认已加入DTT Solution），用移液器反复吹打至无明显沉淀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 e. 贴壁培养细胞：倒出培养液，用1×PBS（pH 7.4）清洗一次。向培养细胞中加入的Buffer RL1（表1中推荐量）（使用前请确认已加入DTT Solution），使用移液器轻轻吹打，使细胞完全脱落，转移含有细胞的裂解液至1.5 mL Nuclease-free离心管中，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 2. 将第一步的动物组织或细胞裂解液上清转移至gDNA Eraser Spin Column中（避免吸取沉淀），12,000 rpm，室温离心1 min； 3. 弃掉gDNA Eraser Spin Column，保留Collection Tube中的滤液； 4. 向上述步骤的滤液中加入等体积的60%异丙醇（此时可能会出现沉淀），用移液器吹打混匀； 5. 将混合液（含沉淀）全部转移至RNA Spin Column中，每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入； 6. 12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液，将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中； 7. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，12,000 rpm，室温离心30 s，弃掉废液； 8. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（请沿RNA Spin Column管壁加入Buffer RW2，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12...