规格 磁珠法动物组织总RNA提取试剂盒（预封装48T） G3690-48T 48T 产品简介 本产品为48T规格预分装板，利用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪以及自主研发的超顺磁性磁珠在一定缓冲条件下对核酸具有强的可逆吸附作用，被设计用于从各种新鲜或冻存动物组织中同时进行48个样本的RNA提取，整个过程在1小时内完成，可替代当前耗时、繁琐的乙醇沉淀步骤以及大量的漂洗步骤。DNase中含有可视化染料，具有加样示踪作用，防止DNase漏加，导致提取的RNA中存在基因组DNA残留。提取的RNA可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等各种分子生物学实验。 储存与运输 DNase，Proteinase K，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G36 90 - 48 T G3690-1 Buffer RL 30 mL G3690-2 DTT Solution 1.2 mL G3690-3 Proteinase K 500 µL G3690-4 DNase 500 µL G3690-5 96孔预封装板 3块 G3690-6 8孔磁棒套 6条 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 检查预封装板是否漏液，如果出现此类现象，请勿使用。 2. 使用前观察磁珠或试剂是否粘在封口膜或试剂预分装板孔壁上，如有此现象可上下混匀后短暂离心或于桌面上轻轻敲击试剂预分装板底部至液滴掉落后再使用。 3. Buffer RL如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 4. 操作前请向Buffer RL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer RL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer RL可在4℃放置一个月。 5. 使用前向预封装板的第4列和第10列孔位的液体（黄色）中加入10 µL DNase（蓝色），加入DNase后液体为绿色。 6. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。 操作步骤 1. 样本裂解： a. 取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液 （推荐 G3019 ） 保存的动物组织5-20 mg （ 皮肤、耳朵等组织需要液氮研磨 ） ，置于提前装有2-3颗3 mm研磨珠 （推荐 G0203-150G ） 和500 μL Buffer RL （使用前请确认已加入DTT Solution） 的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，使用组织研磨仪 （推荐 SWE-3D ） 在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 b. 取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液 （推荐 G3019 ） 保存的动物组织5-20 mg （ 皮肤、耳朵等组织需要液氮研磨 ） ，置于提前装有500 μL Buffer RL （使用前请确认已加入DTT Solution） 的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，把离心管置于冰浴中使用电动研磨器将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 c. 取新鲜、超低温冻存或组织RNA稳定保存液 （推荐 G3019 ） 保存的动物组织5-20 mg，迅速转移至用液氮提前预冷的研钵中，用研杵研磨组织，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响 RNA 的收率和质量） ，然后将研磨成粉末的样本转移至含有500 μL的Buffer RL （使用前请确认已加入DTT Solution） 的1.5 mL Nuclease-free的离心管中，反复吹打混匀，再加入10 µL Proteinase K，混匀后56℃孵育10-15 min，12,000 rpm，4℃离心5 min。 2. 预封装板准备：取出深孔板，孔板离心机500 rpm离心1 min或于桌面上轻轻敲击试剂预分装板底部至液滴掉落后再小心撕去铝箔封口膜； 3. 向预封装板的第4列和第10列孔位的液体 （黄色） 中加入10 µL DNase （ 蓝色 ） ，加入DNase后液体为绿色； 4. 取400 µL上清，转移至预封装板的第1列和第7列孔位 （ 注意尽量不要吸取沉淀 ） ； 5. 将预封装板置于核酸提取仪相应的板位上； 6. Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪参数设置： 步骤 1 2 3 4 5 6 7 8 9 工位 3 1 2 3 4 3 5 6 5 等待时间 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:03:00 00:00:00 00:00:00 00:05:00 00:00:00 混合模式 a 2 2 2 2 2 2 2 2 2 混合时间 00:00:10 00:05:00 00:01:00 00:01:00 00:10:00 00:01:00 00:01:00 00:05:00 00:00:10 是否暂停 Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ 吸磁时间 a 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:01:00 00:00:00 体积（µL） 600 700 500 600 100 600 600 80 600 温度（℃） --- 25.0℃ --- --- --- --- --- --- --- a：如果不使用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪，可根据其他适配本产品的仪器说明书调整吸磁时间和混合模式参数。 7. 安装磁套，运行程序； 8. 自动化提取步骤完成后，将第6列和第12列孔位中的核酸溶液小心转移至新的Nuclease-free离心管中，并于-80℃长期保存。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 请勿将预装板倒置。 3. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。 4. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的吸头和离心管避免交叉污染。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）