规格 RNAiso Easy Plus（Total RNA提取试剂） G3074-200T 200T 产品简介 本产品广泛适用于从动物组织、植物材料、培养细胞等样品中提取Total RNA。与传统Trizol法相比，此试剂盒具有提取过程无需氯仿等有机试剂、提取全程可在室温下操作等优点。样品在RNAiso Easy Plus中能够充分被裂解，在加入Dilution Buffer离心后，会形成上清液（含有RNA）和沉淀（含有蛋白质、多糖、脂肪酸、细胞碎片和DNA），可有效去除杂质，保证了提取的RNA完整性和纯度。可以直接用于Northern杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、qRT-PCR等各种分子生物学实验。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输 ， 2-8 ℃避光保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G 3 074 - 200 T G3074-1 RNAiso Easy Plus 100 mL G3074-2 Dilution Buffer 40 mL 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读 ） 1. RNAiso Easy Plus中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即用大量的水冲洗并立即到医院进行处理。 2. 试剂盒之外所需准备试剂：异丙醇、75%乙醇（RNase-free水配制）、RNase-free水。 3. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用无RNase的枪头、试剂和离心管。 操作步骤 1. 样本 裂解 ： a) 贴壁细胞： 倒出细胞培养液，用1×PBS清洗一次，弃尽废液。每10 cm 2 的细胞培养皿（直径约3.5 cm）中加入1 mL RNAiso Easy Plus，使之均匀分布细胞表面，然后用移液器反复吹打细胞使其脱落。将混合液转移至1.5 mL Nuclease-free离心管，移液器反复吹打混匀后室温放置5 min。对于贴壁牢固的细胞可采用细胞刮勺或者洁净的枪头剥离，或将RNAiso Easy Plus增加至2 mL； b) 悬浮细胞： 1,000 rpm离心5 min收集细胞，尽量将上清液吸除干净，每1-10×10 6 个细胞加入500 μL RNAiso Easy Plus，移液枪吹打数次使细胞裂解，室温静置5 min； c) 动物组织样本： 将超低温冻存组织、RNA稳定保存液（推荐G3019）保存的组织或新鲜组织用液氮速冻后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （研磨不充分可能会影响RNA的收率和质量） 。向研钵中加入RNAiso Easy Plus，每10-50 mg动物组织加入500 μL的RNAiso Easy Plus，将匀浆液转移至离心管中。也可将组织转移至提前装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐G0203-150G）和RNAiso Easy Plus的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，使用组织研磨仪（推荐SWE-3D）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，室温（15-30℃）静置5 min。 d) 植物组织样本： 将超低温冻结的植物组织样品或新鲜组织用液氮速冻后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （研磨不充分可能会影响RNA的收率和质量） 。向研钵中加入RNAiso Easy Plus，每10-30 mg植物组织加入500 μL的RNAiso Easy Plus，将匀浆液转移至离心管中。也可将植物组织转移至提前装有2-3颗3 mm研磨珠（推荐G0203-150G）和RNAiso Easy Plus的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中，使用组织研磨仪（推荐SWE-3D）在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，将会影响RNA的得率和质量） ，室温（15-30℃）静置5 min。 2. 向离心管中加入0.4倍RNAiso Easy Plus体积的Dilution Buffer （即每500 μL的RNAiso Easy Plus，加入200 μL的Dilution Buffer） ，盖紧离心管盖，上下颠倒混合均匀。室温静置5 min，12,000 rpm室温离心15 min。从离心机中小心取出离心管，此时在离心管底部可观察到沉淀，样本中蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底，RNA分布在上层溶液中。当样品的投入低于建议量或样品为培养细胞时，离心后可能观察不到明显沉淀，属正常现象，可继续按步骤提取RNA 。 3. 使用移液器小心吸取上清液至新的Nuclease-free离心管中（约500 μL，切勿吸出或触碰沉淀）。 如果预期样品中RNA含量较少，此时建议尽可能多的吸取上清液，但需注意避免触碰沉淀，如果触碰沉淀可能会导致RNA纯度降低。 4. 向装有上清液的Nuclease-free离心管中加入与上清液等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，室温下静置10 min。 5. 12,000 rpm室温离心10 min。离心后，试管底部会出现RNA沉淀 （当样品中RNA含量较少时，此步骤可能看不见明显沉淀，建议继续后续操作) 。小心弃去废液，切勿触及沉淀。 6. 向离心管沉淀中加入1 mL 75％乙醇 （ RNase-free水配制） ，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，12,000 rpm室温离心3 min，小心弃去废液，切勿触及沉淀 （有时RNA沉淀可能会分散不聚集或不紧实，这种情况下要注意沿液面缓慢吸取废液，避免RNA损失） 。 7. 重复步骤6。 8. 打开离心管盖，室温放置自然干燥数分钟。沉淀干燥后，根据沉淀量加入20~200 μL的RNase-free水溶解沉淀。 通常RNA沉淀晾干2-3 min即可，不可离心或加热干燥，RNA完全干燥后会很难溶解 。 注意事项 1. 应使用RNA提取专用操作试验台与电泳设备。 2. 本产品不适用于液体样品、多糖多酚植物RNA提取。 3. 提取RNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存。 4. 由于产品原理所限，部分特殊样品的RNA提取效果可能会不理想，如果不能满足下游实验需要，推荐使用RNA提取液（G3013）处理此类样品。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 附操作流程简图 （产品包装升级中，以实物为准。 ）