规格 快速质粒DNA小量提取试剂盒 G3688-100T 100T 产品简介 本试剂盒在传统的SDS-碱裂解法的基础上经过改进，可在6 min内进行高质量质粒DNA的提取纯化。经过优化的裂解、结合液再结合高吸附效率的硅胶柱，可快速从1-5 mL的细菌培养物中提取多至35 μg高纯度的质粒DNA。本试剂盒的Buffer S1中包含指示剂，通过其颜色的变化，指示重悬、裂解、中和是否完全，从而保证质粒提取的质量，实现可视化的操作流程。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等分子生物学实验。 储存与运输 RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输及储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3688-100T G3688-1 Buffer BL 50 mL G3688-2 Buffer S1 (Red) 30 mL G3688-3 Buffer S2 30 mL G3688-4 Buffer S3 40 mL G3688-5 Buffer PW 20 mL（使用前加入80 mL无水乙醇） G3688-6 Elution Buffer 12 mL G3688-7 RNase A 300 μL G3688-8 Bind DNA Mini Columns （with Collection Tubes） 100个 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 使用前请先检查Buffer S2是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热数分钟，即可恢复澄清。 2. Buffer S1在使用前先加入全部的RNase A并混匀，置于2-8℃保存。 3. Buffer S2使用后应立即拧紧盖子，避免试剂长时间与空气接触。 4. Buffer PW首次使用前加入80 mL无水乙醇。 5. 柱平衡步骤中Buffer BL的加入能够改善Bind DNA Mini Column的吸附能力并提高Bind DNA Mini Column的均一性和稳定性，消除高温、潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。 操作步骤 1. 柱平衡： 向Bind DNA Mini Column中加入500 μL溶液Buffer BL，12,000 rpm离心30 s，弃掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column重新放回Collection Tube （处理过的柱子请当天使用） ； 2. 细菌收集： 取1-5 mL过夜培养的新鲜菌液加入离心管中，12,000 rpm离心1 min，弃掉上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）； 3. 重悬： 加入250 μL溶液Buffer S1 （使用前请先检查瓶中是否已加入RNase A） ，使用移液器或涡旋振荡器彻底重悬菌体沉淀，混匀后的溶液为浑浊的红色 （注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低） ； 4. 裂解： 向离心管中加入 250 μL溶液Buffer S2 ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解 （注意：温和混合，不可剧烈震荡；此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。添加Buffer S2彻底混匀后，溶液颜色为澄清的紫色；如紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色；裂解建议室温不超过5 min） ； 5. 中和： 向离心管中加入 350 μL溶液Buffer S3 ，立即快速地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时将出现絮状沉淀，12,000 rpm离心2 min （注意：加入溶液Buffer S3后应立即混合，上清中含有少量微小白色沉淀对后续实验没有影响；如上清中存在大量微小白色沉淀，可再次离心后取上清；添加Buffer S3彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色） ； 6. 将上清液转移至Bind DNA Mini Column中，注意尽量不要吸取沉淀，12,000 rpm离心30 s，弃去Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中； 7. 向Bind DNA Mini Column中加入700 μL溶液Buffer PW （使用前请先检查是否已加入无水乙醇） ，12,000 rpm离心30 s，倒掉Collection Tube中的废液，将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中； 8. 将Bind DNA Mini Column放入Collection Tube中，12,000 rpm离心1 min，除去残留的液体； 9. 将Bind DNA Mini Column放入一新的1.5 mL Nuclease-free离心管中，向Bind DNA Mini Column的膜中间位置悬空滴加50-100 μL Elution Buffer或Nuclease-free Water （60-65℃预热Elution Buffer或Nuclease-free Water后再使用效果更好） ，12,000 rpm离心30 s，收集质粒DNA溶液 （注意：洗脱液的体积不应少于50 μL，体积过少会影响回收的效率） 。 注意事项 1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝或大于10 kb，应加大菌体使用量，使用5-10 mL过夜培养物，同时按照比例增加Buffer S1、Buffer S2、Buffer S3的用量，Elution Buffer应在60-65℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以提取效率。 2. 各溶液使用后请及时将盖子拧紧，防止溶剂挥发。 3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 附操作流程简图 （产品包装升级中，以实物为准。 ）