规格 多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒 G3643-50T 50 T 产品简介 本试剂盒设计用于专门从多种富含多糖、多酚等复杂的植物组织样本或真菌样本中安全、快速、高效地提取高纯度基因组DNA。本产品通过精心优化的裂解缓冲体系不仅可以对植物组织样本进行直接研磨和裂解，还可以有效的去除植物组织样本中的多糖、多酚及蛋白质等杂质，整个操作过程可以在1小时内完成，提取得到的高纯度基因组DNA可用于后续的PCR反应、酶切反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种常规分子生物学实验。 储存与运输 RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G36 43 - 50 T G3643-1 Buffer PGLA 40 mL G3643-2 Buffer PGLB 8 mL G3643-3 Buffer GB 12 mL（使用前加入28 mL异丙醇） G3643-4 Buffer GD 12 mL（使用前加入18 mL无水乙醇） G3643-5 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3643-6 RNase A 500 μL G3643-7 Buffer TE 10 mL G3643-8 DNA Spin Columns （with Collection Tubes） 50个 说明书 1份 1. 超低温冻存的植物样本避免反复冻融，否则会导致提取的DNA质量与产量下降。 2. Buffer PGLA如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 3. 使用前请向Buffer GB中加入28 mL异丙醇，混匀后使用。 4. 使用前请向Buffer GD中加入18 mL无水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。 5. 植物组织样本的起始量对基因组DNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，基因组DNA的提取质量与相对收量都会有所降低，若样本太大，导致研磨不充分，也会影响基因组DNA质量与得率。在实验开始之前，请参考下表Table 1中植物组织样本不同起始量 对应的 Buffer PGLA 和 Buffer PGLB 的适宜使用量以及样本剪切大小。 Table 1 植物组织样本不同起始量 对应的 Buffer PGLA 和 Buffer PGLB的使用量 以及样本剪切大小 样本 类型 取样量 样本剪切大小 Buffer PGLA 使用量 Buffer PGLB 使用量 叶片 50-100 mg 剪切至0.5 cm或0.5 cm 2 750 μL 150 μL 果实 100-200 mg 切绿豆大小 750 μL 150 μL 茎 100-200 mg 切绿豆大小或0.5 cm 750 μL 150 μL 根 100-200 mg 切绿豆大小或0.5 cm 750 μL 150 μL 种子 20-50 mg 较硬种子使用研钵尽量磨成粉末状 500 μL 100 μL 操作步骤 1. 植物组织样本裂解： a. 提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐 HT-200-M ）中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGL A，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐 G0104-200G ），取表1中推荐量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移研磨管中，将研磨管置于研磨仪（推荐 SWE-3D ）中进行研磨 （ 推荐研磨程序：频率 70HZ， 每次 30 s，研磨 15-20 次 ， 每次 间隔5 s ， 如果是种子等比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30或者更多 ） ，直至研磨成匀浆状 （如果组织 未 被彻底匀浆，会影响DNA得率和质量） 。待充分研磨后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 b. 取Table 1中推荐的使用量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小）迅速转移到装有3-4颗4 mm的研磨钢珠（推荐 G0104-200G ）并用液氮预冷的2.0 mL Nuclease-free研磨管（推荐 HT-200-M ）中，将研磨管置于研磨仪（推荐 SWE-3D ）中 （放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷） 进行研磨 （ 推荐研磨程序：频率 70HZ， 每次 30 s，研磨 15-20 次 ， 每次 间隔5 s ， 如果是种子等比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30或者更多 ） ，直至研磨成粉末状（ 如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响DNA得率和质量） 。加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLA，再次置于研磨仪中研磨1 min。待充分研磨后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 c. 取新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响 D NA 的收率和质量） 。然后将研磨成粉末的样本（Table 1中推荐的使用量）加入到含有适量的Buffer PGLA（Table 1中推荐的使用量）的1.5 mL Nuclease-free离心管中，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 1. 取Table 1中推荐的使用量的新鲜或超低温冻存的植物组织（表1中推荐剪切大小），迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响 D NA 的收率和质量） 。然后向离心管中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLA，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 2. 向离心管中加入Table 1中推荐使用量的Buffer PGLB，迅速颠倒混匀，冰上放置5 min； 3. 12,000 rpm 4℃离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL离心管中 （如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次 12,000 rpm 4 ℃离心 2 min，将上清转移至另一新的1 .5 m L 离心管中） ； 4. 向离心管中加入与上清液等体积的Buffer GB，上下颠倒混匀； 5. 并将上述混合液转移至DNA Spin Column中。每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入； 6. 12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液。将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中； 7. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer GD，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液； 8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（ 请沿管壁加入 B...