规格 磁珠法多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒 G3622-50T 50T 产品简介 本试剂盒通过特别优化的裂解缓冲体系，结合超顺磁性磁珠特异性结合DNA的特点，可从20-300 mg富含多糖、多酚的植物组织样本（叶片，种子，果实等）中安全、快速、高效地提取基因组DNA。特别优化的裂解缓冲体系可以去除植物样本中的多糖、多酚、蛋白质及细胞碎片等杂质。无需苯酚、氯仿等有机试剂，无需多步离心。提取得到的基因组DNA可用于后续的PCR反应、酶切反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种常规分子生物学实验。 储存与运输 RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3622 -50T G3622-1 Buffer PGLA 40 mL G3622-2 Buffer PGLB 8 mL G3622-3 Buffer GB 30 mL G3622-4 Buffer GD 16 mL（使用前加入24 mL无水乙醇） G3622-5 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3622-6 SweMag Beads 2×1 mL G3622-7 RNase A 1 mL G3622-8 Buffer TE 10 mL 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. Buffer PGLA如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 2. 使用前请向Buffer GD中加入24 mL无水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。 3. 植物组织样本的起始量对基因组DNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，基因组DNA的提取质量与相对收量都会有所降低。在实验开始之前，请参考下表Table 1中植物组织样本不同起始量对应的Buffer PGLA和Buffer PGLB的适宜使用量。 Table 1植物组织样本不同起始量对应的Buffer PGLA和Buffer PGLB的使用量 植物组织样本类型 植物组织样本起始量 裂解液Buffer PGLA的适宜使用量 Buffer PGLB使用量 植物叶片、种子 ≤50 mg 500 μL 100 μL 50-100 mg 750 μL 150 μL 植物果实、块茎 100-300 mg 500 μL 100 μL 注：植物叶片的起始 量 推荐量为50-100 mg；植物种子的起始 量 推荐量为20-100 mg；植物果实、块茎的起始 量 推荐量为100-300 mg。 操作步骤 1. 植物组织样本裂解： a. 裂解液＋研磨仪研磨裂解：提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管 （ 推荐HT-200-M ） 中加入Buffer PGLA （Table 1中的推荐使用量） ，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠 （推荐 G0104-200G ） ，取新鲜或超低温冻存的植物组织20-300 mg （叶片样本剪碎至0.5 cm 2 ，种子样本优先去壳切成碎末，果实、块茎样本切碎至 米粒大小 ） ，迅速转移至研磨管中，将研磨管置于研磨仪 （推荐 SWE-3D ） 中进行研磨 （推荐研磨程序：频率70HZ，每次30 s，研磨15-20次，每次间隔5 s，如果是比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30次或者更多） ，直至研磨成匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，会影响DNA的得率和质量） 。待充分研磨后，加入20 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 b. 液氮＋研磨仪研磨裂解：取新鲜或超低温冻存的植物组织20-300 mg （叶片样本剪碎至0.5 cm 2 ，种子样本优先去壳切成碎末，果实、块茎样本切碎至 米粒大小 ） ，迅速转移到装有3-4颗3 mm的研磨氧化锆珠 （推荐 G0203-150G ） 并用液氮预冷的2.0 mL Nuclease-free研磨管 （ 推荐HT-200-M ） 中，将研磨管置于研磨仪 （推荐 SWE-3D ） 中 （放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷） 进行研磨，直至研磨成粉末状 （如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量） 。加入Buffer PGLA （Table 1中的推荐使用量） 混匀，再加入20 μL RNase A，颠倒混匀，65℃水浴15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 c. 液氮＋研钵研磨裂解：取新鲜或超低温冻存的植物组织20-300 mg （叶片样本剪碎至0.5 cm 2 ，种子样本优先去壳切成碎末，果实、块茎样本切碎至 米粒大小 ） ，迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量） 。将研磨成粉末的样本加入到含有Buffer PGLA （Table 1中的推荐使用量） 的1.5 mL Nuclease-free离心管中混匀，再加入20 μL RNase A，颠倒混匀，65℃水浴15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 d. 液氮＋研杵棒研磨裂解：取新鲜或超低温冻存的植物组织20-300 mg （叶片样本剪碎至0.5 cm 2 ，种子样本优先去壳切成碎末，果实、块茎样本切碎至 米粒大小 ） ，迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响DNA的得率和质量） 。向离心管中加入Buffer PGLA （Table 1中的推荐使用量） 混匀，再加入20 μL RNase A，颠倒混匀，65℃水浴15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 2. 向离心管中加入Buffer PGLB （Table 1中的推荐使用量） ，充分颠倒混匀，冰上放置5 min； 3. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至一新的离心管中 （如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清转移至另一新的离心管中） ； 4. 向第3步加入与上清等体积Buffer GB，充分上下颠倒混匀； 5. 加入与上一步混合液等体积的异丙醇，充分上下颠倒混匀。再加入40 μL SweMag Beads （SweMag Beads使用前需分散均匀） ，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀； 6. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀数次，保持磁珠处于悬浮状态； 7. 将离心管移至磁力架上静置30 s （ 如果第5步的混合液体积超过2 mL，将混合液分批次转移至2 mL离心管中进行吸磁，或者使用更大规格的磁力架 ） ，待上清清澈后，吸弃上清； 8. 加入600 μL Buffer GD，移开磁力架，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，待上清清澈后，吸弃上清； 9. 加入700 μL Buffer PW，移开磁力架，使用移液器吹打或涡旋振荡至磁珠分散...