规格 植物基因组DNA提取试剂盒 G3634-50T 50T 产品简介 本试剂盒通过利用特异与DNA结合的膜技术专门提取非多糖多酚植物组织基因组DNA。植物组织样本不需要液氮研磨，直接利用裂解液进行研磨并裂解后，能够快速从50-100 mg的植物组织样本中提取纯化得到1-20 µg的高纯度基因组DNA，整个提取操作可以在1小时内完成，提取的基因组DNA可用于PCR反应、酶切反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种常规分子生物学实验。 储存与运输 RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3634 -50T G3634-1 Buffer PGL1 25 mL G3634-2 Buffer PGL2 5 mL G3634-3 Buffer GB 5 mL（使用前加入20 mL异丙醇） G3634-4 Buffer GD 12 mL（使用前加入18 mL无水乙醇） G3634-5 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3634-6 RNase A 500 μL G3634-7 Buffer TE 10 mL G3634-8 DNA Spin Columns （with Collection tubes） 50个 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 超低温冻存的植物样本避免反复冻融，否则会导致提取的DNA质量与产量下降。 2. Buffer PGL1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 3. 使用前请向Buffer GB中加入20 mL异丙醇，混匀后使用。 4. 使用前请向Buffer GD中加入18 mL无水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。 5. 植物组织样本的起始量和样本剪切大小对基因组DNA的提取效果有很大影响。若起始量过多，基因组DNA的提取质量与相对收量都会有所降低，若样本太大，导致研磨不充分，也会影响基因组DNA质量与得率。在实验开始之前，请参考下表Table 1中植物组织样本不同起始量和样本剪切大小。 表1植物组织样本不同起始量 和样本剪切大小 样本类型 样本 量 样本剪切大小 叶片 50-100 mg 剪切至0.5 cm或0.5 cm 2 茎 50-100 mg 剪切至0.5 cm 须状根 50-100 mg 剪切至0.5 cm 操作步骤 1. 植物组织样本裂解： a. 提前向2.0 mL Nuclease-free研磨管 （推荐 HT-200-M ） 中加入500 μL Buffer PGL1，再加入3-4颗4 mm的研磨钢珠 （推荐 G0104-200G ） ，取50-100 mg新鲜或超低温冻存的植物组织 （ 表1中推荐剪切大小 ） ，迅速转移研磨管中，将研磨管置于研磨仪 （推荐 SWE-3D ） 中进行研磨 （ 推荐研磨程序：频率 70HZ， 每次 30 s，研磨 15-20 次 ， 每次 间隔5 s ， 如果是种子等比较难研磨的样本，可以将研磨次数增加至30或者更多 ） ，直至研磨成匀浆状 （如果组织没有被彻底匀浆，会影响DNA得率和质量） 。待充分研磨后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 b. 取50-100 mg新鲜或超低温冻存的植物组织 （ 表1中推荐剪切大小 ） ，迅速转移到装有3-4颗4 mm的研磨钢珠 （推荐 G0104-200G ） 并用液氮预冷的2.0 mL Nuclease-free研磨管 （推荐 HT-200-M ） 中，将研磨管置于研磨仪 （推荐 SWE-3D ）中进行研磨 （ 放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷，推荐研磨程序：频率 7 0 HZ，温度4℃，每次30 s，研磨4次，间隔5 s） ，直至研磨成粉末状 （如果组织没有被完全研磨成粉末状，会影响DNA得率和质量） 。加入500 μL Buffer PGL1，再次置于研磨仪上研磨1 min后，加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 c. 取新鲜或超低温冻存的植物组织 （ 表1中推荐剪切大小 ） ，迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响 DNA 的收率和质量） 。然后将研磨成粉末的样本 （ 50-100 mg ） 加入到含有500 μL Buffer PGL1的1.5 mL Nuclease-free离心管中，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 d. 取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg （ 表1中推荐剪切大小 ） ，迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL Nuclease-free离心管中，加入液氮，用一次性研杵棒研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状 （如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响 DNA 的收率和质量） 。然后向离心管中加入500 μL Buffer PGL1，再加入10 μL RNase A，颠倒混匀，65℃孵育15 min，每隔5 min颠倒混匀一次。 2. 向离心管中加入100 μL Buffer PGL2，颠倒混匀，冰上放置5 min； 3. 12,000 rpm 4℃ 离心5 min，将上清转移至一新的1.5 mL离心管中 （如果取得的上清中仍存在有漂浮物，需要再次 12,000 rpm 4℃离心2 min，将上清转移至另一新的1.5 mL离心管中） ； 4. 向离心管中加入与上清液等体积的Buffer GB，上下颠倒混匀，短暂离心，将管壁残留溶液收集于管底； 5. 将DNA Spin Column安置于Collection Tube上，并将上述混合液转移至DNA Spin Column中。每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入； 6. 12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液。将DNA Spin Column重新放回Collection Tube中； 7. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer GD，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉滤液； 8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW （请沿管壁加入Buffer PW，有助于冲洗管壁上残留的盐分） ，12,000 rpm室温离心1 min，弃掉废液； 9. 重复操作步骤8； 10. 将DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm室温离心2 min，除去残留的液体； 11. 将DNA Spin Column置于一新的1.5 mL的离心管中，打开盖子，室温放置5-10 min，使DNA Spin Column残留的乙醇完全挥发； 12. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-f...