磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒，高效、自动地从各种革兰氏阴性菌和大部分革兰氏阳性菌中纯化基因组DNA，搭配赛维尔全自动核酸提取仪 Y-48 最多同时进行48个样本的基因组DNA提取，提取的基因组DNA可直接用于PCR扩增、Southern杂交、文库构建等分子生物学实验。 规格 磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒（预封装48T） G3697-48T 48T 产品简介 本产品为48T规格预封装板，利用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪以及自主研发的超顺磁性磁珠，在特别优化的缓冲条件下可高效、自动地从各种革兰氏阴性菌和大部分革兰氏阳性菌中纯化基因组DNA。本产品被设计用于最多同时进行48个样本的基因组DNA提取，整个过程在1 h内完成，可替代当前耗时、繁琐的乙醇沉淀步骤以及多次的漂洗步骤，极大的节省人工操作时间。提取的基因组DNA可直接用于PCR扩增、Southern杂交、文库构建等多种分子生物学实验。 储存与运输 Lysozyme、Proteinase K，RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3697 - 48 T G3697-1 Lysozyme 1 mL G3697-2 Lysozyme Buffer 7 mL G3697-3 Buffer MB1 17 mL G3697-4 Buffer MB2 17 mL G3697-5 Proteinase K 1 mL G3697-6 RNase A 500 μL G3697-7 96孔预封装板 3块 G3697-8 8孔磁棒套 6条 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 检查预封装板是否漏液，如果出现此类现象，请勿使用。 2. 使用前观察磁珠或试剂是否粘在封口膜或试剂预分装板孔壁上，如有此现象可上下混匀后短暂离心或于桌面上轻轻敲击试剂预分装板底部至液滴掉落后再使用。 3. Buffer MB1如有沉淀现象，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 操作步骤 1. 取1-3 mL过夜培养的新鲜菌液 （菌液浓度不超过OD600=2.5） 于1.5 mL离心管中，12,000 rpm离心1 min，尽量吸除上清。 注意： 对于革兰氏阳性菌，收集完菌体后需加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入130 µL Lysozyme Buffer和20 µL Lysozyme，涡旋振荡至菌体彻底悬浮，37℃水浴60 min，每10 min颠倒混匀一次； 2. 向离心管中加入300 μL Buffer MB1，涡旋振荡混匀； 3. 向离心管中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器吹打或涡旋振荡混匀后于56℃孵育30 min，此时溶液呈现透明状 （如果此时溶液未透明，应延长反应时间，每10 min混匀一次，革兰氏阳性菌孵育温度可以提高到65℃） ； 4. 向离心管中加入300 μL Buffer MB2，此时可能会出现絮状沉淀，用移液器吹打混匀； 5. 预封装板准备：取出深孔板，孔板离心机500 rpm离心1 min或于桌面上轻轻敲击试剂预封装板底部至液滴掉落后再小心撕去铝箔封口膜； 6. 将第4步液体全部转移至预封装板的第1列和第7列孔位； 7. 将预封装板置于核酸提取仪相应的板位上； 步骤 1 2 3 4 5 6 7 工位 3 1 2 3 4 5 4 等待时间 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:00:00 00:05:00 00:00:00 混合模式 a 2 2 2 2 2 2 2 混合时间 00:00:10 00:05:00 00:02:00 00:02:00 00:02:00 00:05:00 00:00:10 是否暂停 Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ Ⓧ 吸磁时间 a 00:00:30 00:01:00 00:00:30 00:00:30 00:00:30 00:01:00 00:00:00 体积（µL） 600 600 500 600 600 80 600 温度（℃） --- 25.0℃ --- --- --- 65.0℃ --- a：如果不使用Servicebio Y-16 、 Y-48 全自动核酸提取仪，可根据其他适配本产品的仪器说明书调整吸磁时间和混合模式参数。 9. 安装磁套，运行程序； 10. 自动化提取步骤完成后，将第5列和第11列孔位中的核酸溶液小心转移至新的Nuclease-free离心管中，并于-20℃长期保存。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 请勿将预装板倒置。 3. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响DNA洗脱效率。 4. 应尽量使用新鲜的菌体，以确保提取得到的基因组DNA的得率与完整性。 5. 提取的菌体起始量切勿太多，且要充分裂解，否则可能影响基因组DNA的得率与纯度。 6. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的吸头和离心管避免交叉污染。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）