规格 石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒 G3635-50T 50T 产品简介 本试剂盒适用于福尔马林固定、石蜡包埋组织（FFPE）的基因组DNA提取，并采用了特殊的脱蜡试剂，不含二甲苯等有机溶剂，安全无毒、可有效地去除石蜡并释放出组织样本。本试剂盒利用特殊的裂解缓冲液再结合离心柱法能快速有效地提取石蜡包埋组织基因组DNA，提取过程可在1 h内完成，DNA得率大，纯度高，适用于多种下游应用，如PCR、Real-Time PCR、SNP基因分型等多种分子生物学实验。 储存与运输 RNase A和Proteinase K冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其它试剂室温运输及储存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G3635-50T G3635-1 Buffer DP 30 mL G3635-2 Buffer GL 10 mL G3635-3 Proteinase K 1 mL G3635-4 RNase A 500 μL G3635-5 Buffer GB 10 mL G3635-6 Buffer GP 9 mL（使用前加入21 mL无水乙醇） G3635-7 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3635-8 Buffer TE 10 mL G3635-9 DNA Spin Columns 50套 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. 提前准备好80℃、56℃和90℃的水浴或金属浴。 2. 如果Buffer GL和Buffer GB出现沉淀，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 3. 使用前请向Buffer GP中加入21 mL无水乙醇，Buffer PW中加入56 mL无水乙醇，混合均匀后使用。 操作步骤 1. 样本处理 I. 石蜡切片：取石蜡切片（1×1 cm 2 大小）5-8张，用灭菌手术刀刮取并收集组织碎片，置于1.5 mL离心管中。 II. 石蜡包埋的组织块：用灭菌手术刀刮取约30 mg组织样本，尽量去除多余的石蜡并切碎样本，置于1.5 mL离心管中。 III. 福尔马林浸泡的组织：用滤纸吸干组织表面的液体，取约30 mg样本切碎并置于1.5 mL离心管中，加入500 μL PBS缓冲液（pH 7.4），涡旋振荡10 s后12,000 rpm室温离心1 min，弃上清，重复3次。 2. 向装有样本的1.5 mL离心管中加入500 μL Buffer DP，80℃孵育3 min，趁热涡旋振荡10 s； 3. 向离心管中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡混匀，12,000 rpm室温离心1 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）； 4. 于下层水相中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器轻轻吹打混匀（尽量不要破坏分层），56℃孵育20 min； 5. 随后将离心管转移至90℃孵育10 min（若未消化完全的组织块较多，可适当延长孵育时间至20 min），冷却至室温； 6. 向上一步的样本中加入200 μL Buffer GB和200 μL无水乙醇，涡旋振荡混匀； 7. 12,000 rpm室温离心1 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）； 8. 取下层水相溶液至DNA Spin Column中（不要取到上层油相溶液和其他杂质），12,000 rpm室温离心2 min，弃滤液； 9. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer GP，12,000 rpm室温离心1 min，弃滤液； 10. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（请沿管壁加入Buffer PW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm室温离心1 min，弃滤液； 11. 重复步骤10； 12. 将DNA Spin Column置于收集管上，12,000 rpm室温离心2 min，取出DNA Spin Column置于新的1.5 mL离心管上； 13. 将DNA Spin Column开盖室温放置3-5 min，尽量去除乙醇残留； 14. 向DNA Spin Column的膜中央悬空加入50-100 μL 65℃预热的Buffer TE或Nuclease-free Water，室温静置5 min，12,000 rpm离心2 min，收集DNA溶液。若想要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm离心2 min，再次洗脱DNA。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 本试剂盒提取DNA的得率和完整性依赖于样本种类，固定时间、固定条件以及样本储存时间等。固定时间最好在8-24 h以内，如果样本固定时间超过24小时或者存放时间超过1年，则会导致DNA碎片化过多，而无法扩增出目的条带。 3. 样本包埋前需完全脱水，以防止残留的福尔马林对后续实验造成影响。 4. 包埋组织取样时应尽量去除多余的石蜡并切碎样本，且取样量不要超过30 mg，否则易造成裂解不充分的情况，影响核酸得率。 5. 提取的基因组DNA作为PCR扩增模板时，建议先做模板浓度梯度测试，选择最佳模板浓度进行扩增。 6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 附操作流程简图 （产品包装升级中，以实物为准。 ）