规格 磁珠法石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒 G3605-50T 50T 产品简介 本试剂盒采用独特的脱蜡试剂，能够高效去除石蜡包埋组织周围的蜡块，避免使用二甲苯等有毒试剂，通过特别优化的裂解缓冲液有效地释放组织中的基因组DNA，以及利用超顺性磁珠特异结合基因组DNA的特性，能够快速、有效地提取组织中的基因组DNA。获得的基因组DNA收量大、纯度高，适用于PCR、Real-Time PCR、SNP基因分型等多种分子生物学实验。 储存与运输 RNase A和Proteinase K冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其它试剂室温运输及储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3605 - 50T G3605-1 Buffer DP 30 mL G3605-2 Buffer GL 10 mL G3605-3 Proteinase K 1 mL G3605-4 RNase A 500 μL G3605-5 Buffer GB 10 mL G3605-6 SweMag Beads 1.5 mL G3605-7 Buffer GP 9 mL（使用前加入21 mL无水乙醇） G3605-8 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3605-9 Buffer TE 10 mL 说明书 1份 使用前准备 1. 提前准备80℃、56℃和90℃的水浴或金属浴。 2. 如果Buffer GL和Buffer GB出现沉淀，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 3. 使用前请向Buffer GP加入21 mL无水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL无水乙醇，混合均匀后使用。 4. 自备磁力架，异丙醇。 操作 步骤 1. 样本处理 (1) 石蜡切片 ：取石蜡切片（1×1 cm 2 大小）5-8张，用灭菌手术刀刮取并收集组织碎片，置于1.5 mL离心管中。 (2) 石蜡 包埋的组织 块 ：用灭菌手术刀刮取约30 mg组织样本，尽量去除多余的石蜡并切碎样本，置于1.5 mL离心管中。 (3) 福尔马林浸泡的组织 ：用滤纸吸干组织表面的液体，取约30 mg样本切碎并置于1.5 mL离心管中，加入500 μL PBS缓冲液（pH7.4），涡旋振荡10 s后12,000 rpm室温离心1 min，弃上清，重复3次。 2. 向装有样本的1.5 mL离心管中加入500 μL Buffer DP，80℃孵育3 min，趁热涡旋振荡10 s； 3. 向离心管中加入200 μL Buffer GL，涡旋振荡混匀，12,000 rpm室温离心1 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）； 4. 于下层水相中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器轻轻吹打混匀（尽量不要破坏分层），56℃孵育20 min； 5. 随后将离心管转移至90℃孵育10 min（若未消化完全的组织块较多，可适当延长孵育时间至20 min），冷却至室温； 6. 向上一步的样本中加入200 μL Buffer GB和200 μL异丙醇，涡旋振荡混匀； 7. 12,000 rpm室温离心1 min，溶液形成上下两层（上层为油相，下层为水相）； 8. 取下层水相溶液至一新的1.5 mL离心管中（不要取到上层油相溶液和其他杂质），向离心管中加入30 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀； 9. 室温放置5 min，期间使用移液器吹打混匀2-3次，使磁珠保持分散均匀的状态； 10. 将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附至管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 11. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μL Buffer GP，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 12. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入600 μL Buffer PW，用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 13. 重复操作步骤12； 14. 将离心管盖打开，室温放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全挥发（请勿使磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）； 15. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入50-100 μL Buffer TE或无酶水，用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置3 min； 16. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的离心管中，即得高纯度的基因组DNA。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 本试剂盒提取DNA的得率和完整性依赖于样本种类，固定时间、固定条件以及样本储存时间等。固定时间最好在8-24 h以内，如果样本固定时间超过24小时或者存放时间超过1年，则会导致DNA碎片化过多，而无法扩增出目的条带。 3. 样本包埋前需完全脱水，以防止残留的福尔马林对后续实验造成影响。 4. 包埋组织取样时应尽量去除多余的石蜡并切碎样本，且取样量不要超过30 mg，否则易造成裂解不充分的情况，影响核酸得率。 5. 磁珠易沉淀，使用前应摇匀或涡旋混匀，磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻。 6. 洗脱基因组DNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验，但请勿长时间干燥磁珠，以免影响基因组DNA洗脱效率。 7. 提取的基因组DNA作为PCR扩增模板时，建议先做模板浓度梯度测试，选择最佳模板浓度进行扩增。 8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 附操作流程简图 （产品包装升级中，以实物为准。 ）