规格 DNase残留检测试剂盒 G3057-100T 100T 产品简介 脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）是一类降解DNA和RNA分子的水解酶，广泛存在于环境、试剂（如酶）和生物材料（如PCR反应管）中，核酸酶的微量残留可使大量的核酸降解，对下游生物实验造成一定的影响。因此，对生物实验室的试剂、耗材和容器定期做核酸酶残留检测非常有必要。 本试剂盒是一种基于荧光探针的高灵敏度DNase快速检测试剂盒。本试剂盒中包含一种独特的DNA修饰底物（DNase Substrate），该底物的两端分别带有荧光基团和淬灭基团，荧光基团的激发/发射波长为575/602，正常情况下由于荧光基团和淬灭基团距离比较接近，底物只能发出微弱的荧光；当有DNase存在时，荧光基团和淬灭基团之间的键被切断，在激发光波下可产生大量的荧光信号，全程在30 min内完成。由于DNA底物的荧光会随着DNase活性的增加而增加，因此可对使用荧光计监测得到的结果进行动力学评估。 本试剂盒提供了DNaseⅠ作为检测体系的阳性对照，DNaseⅠ的最低检出量为5×10 -4 U。除了DNaseⅠ，本试剂盒还可以检测多种其他的DNase，如Benzonase、Micrococcal Nuclease、Mung Bean Nuclease、S1 Nuclease、Exonuclease Ⅲ等。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3 0 57 -100T G3057-1 10×Reaction Buffer 2×1 mL G3057-2 DNase I（1 U/μL） 20 μL G3057-3 DNase Substrate 500 μL G3057-4 ZnSO 4 （100 mM） 200 μL G3057-5 Nuclease-free Water 20 mL 说明书 1份 使用前准备 1. 96孔黑色酶标板（Nuclease-free）。 2. Nuclease-free移液器、吸头。 操作步骤 1. 配制反应体系前准备： a) 稀释一系列DNaseⅠ浓度梯度制作标准曲线：用Nuclease-free Water将DNaseⅠ（1 U/μL）稀释为：0.00005 U/µL、0.0005 U/µL、0.005 U/µL、0.05 U/µL，不加DNaseⅠ作为阴性对照，分别取10 µL加入到96孔酶标板中，最终DNaseⅠ的量为0、0.0005 U、0.005 U、0.05 U、0.5 U； b) 样品制备：如果待检样品为液体，可直接使用；如果待检样品为固体，取样后，需浸泡于Nuclease-free Water中制备成液体样品备用； 2. 参照下表配制反应体系： 配制反应体系时，请按照下表将试剂盒对应组分加入到96孔板。 Step Minus-DNase Ⅰ control Plus-DNase Ⅰ control Experimental samples 10×Reaction Buffer 10 μL 10 μL 10 μL DNaseⅠ 0 10 μL 0 Sample 0 0 10 μL DNase Substrate a 5 μL 5 μL 5 μL Nuclease-free Water To 100 μL To 100 μL To 100 μL a. DNase Substrate可放在最后加入反应体系中，避免被提前降解；若检测的核酸酶为Zn 2+ 依赖，如Mung Bean Nuclease、S1 Nuclease等，向反应体系中另加入1 μL 100 mM ZnSO 4 。 3. 检测： 将反应体系振荡或轻轻吹打混匀，确保充分混匀后立即使用酶标仪检测，设置酶标仪检测温度为37℃（如果酶标仪没有温度设置，可进行室温检测，此时酶活可能偏低），激发/发射波长为575/602，连续检测30 min，时间间隔为2 min（检测时间可根据DNase含量进行调整，含量较低时可延长酶标仪检测时间至60 min，时间间隔为5 min） 。 4. 根据DNaseⅠ的标准曲线计算出样品中残留的DNaseⅠ量。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 反应体系的配制需要在冰上操作，避免DNase Substrate被提前降解。 3. 为确保检出的准确性，请至少配制两个复孔。 4. 使用Nuclease-free Water稀释DNase I做标准曲线时需要现配现用。 5. 如果不是检测样品中DNase I的残留情况，可不用制作DNase I的标准曲线。 6. 反应液配制过程应全程在冰上进行。 7. DNase Substrate需避光，配制反应液时应避免强光照射。 8. 反应液的配制、分装请使用Nuclease-free吸头，尽量避免样品间交叉污染。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）