规格 DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒 G3639-50T 50T 产品简介 表观遗传学是研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因的表达和调控的可遗传变化的一门遗传学分支学科。其中DNA甲基化是被最早发现，也是研究最为深入的表观遗传调控机制之一。在许多动植物中，DNA甲基化是以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，在甲基转移酶的催化下，胞嘧啶嘧啶环的第五个碳位置共价结合一个甲基基团。 在原核生物和真核生物中DNA甲基化是一种自然发生的事件。在原核生物中，DNA甲基化可保护宿主DNA不被限制性内切酶消化，而这些限制性内切酶可以消除外源DNA；在高等真核生物中，DNA甲基化在基因表达的调控中发挥重要作用。 本产品是利用亚硫酸氢盐处理甲基化的DNA，将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，整个过程可在4 h内完成，转化效率可达99%以上。同时本产品采用于磁珠上脱硫并回收DNA的方法，有效提高转化后的DNA的回收量，整个操作流程极为简便。经转化后的DNA可用于PCR扩增和下游分析实验，包括限制性内切酶酶切、测序、微阵列等。 储存与运输 室温运输及储存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3639-50T G3639-1 CT Conversion Reagent 10次/管×5支 G3639-2 Buffer BM 1.5 mL G3639-3 Buffer GB 10 mL G3639-4 Buffer BP 1 mL×2支 G3639-5 Buffer DB 3.6 mL（使用前加入8.4 mL无水乙醇） G3639-6 Buffer PW 24 mL（使用前加入56 mL无水乙醇） G3639-7 SweMag Beads 1 mL G3639-8 Nuclease-free Water 10 mL 说明书 1份 使用前须知（请仔细阅读） 1. CT Conversion Reagent使用前先加入280 μL Buffer BM和910 μL Nuclease-free Water，涡旋至溶解，-20℃保存。 2. 使用前请向Buffer DB加入8.4 mL无水乙醇，Buffer PW加入56 mL无水乙醇，混匀后使用。 3. 自备磁力架，异丙醇。 操作步骤 1. 取20 μL基因组DNA（总量为500 ng-2000 ng，如果体积不足20 μL可用Nuclease-free Water补足）置于PCR管内，加入130 μL CT Conversion Reagent，使用移液器轻轻吹打混匀； 2. 将第一步的混合物转移至PCR仪中，设置98℃ 10 min，64℃ 2.5 h，运行结束后产物置于4℃保存； 3. 向上述产物中加入150 μL Buffer GB和130 μL异丙醇，使用移液器吹打混匀，再加入15 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀； 4. 室温放置10 min，期间使用移液器吹打混匀3-4次，使磁珠保持分散均匀状态； 5. 将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附至管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 6. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 7. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入200 μL Buffer DB，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，室温放置15 min，期间每隔3-5 min吹打混匀一次（Buffer DB处理时间不应过长，以免造成基因组DNA过度碎片化），将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 8. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，再将离心管移至磁力架上静置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸弃上清（为避免影响提取效率，勿将磁珠吸出）； 9. 重复步骤8； 10. 将离心管盖打开，室温放置5-10 min或65℃放置3-5 min，使乙醇完全挥发（请勿使磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）； 11. 将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入30-50 μL Nuclease-free Water，使用移液枪将磁珠吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min； 12. 将离心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的离心管中，即得转化后的DNA溶液。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 磁珠易沉淀，使用前应摇匀或涡旋均匀。 3. Buffer DB处理时间不能过长，容易造成DNA过度碎片化，影响后续实验。 4. 磁珠洗脱前应彻底去除乙醇，避免残留乙醇影响DNA洗脱效率和下游实验。 5. 请勿长时间干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集。 6. 回收后的DNA请于-20℃保存，避免反复冻融。 7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 附操作流程简图 （产品包装升级中，以实物为准。 ）