规格 SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover) G3333-50 50 rxns G3333-100 100 rxns 产品简介 本产品利用改造后的突变体逆转录酶以总RNA或mRNA为模板，高效逆转录合成第一链cDNA，试剂盒中包含合成高质量第一链cDNA所需的全部试剂，并提供两种cDNA合成引物供选择：Random Hexamer Primer和Oligo (dT) 18 Primer，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或qPCR反应。SweScript RT II (Reverse Transcriptase)是基于M-MLV Reverse Transcriptase并通过体外进化筛选获得的突变体逆转录酶，SweScript RT II无RNase H活性，避免了第一链cDNA合成反应中DNA/RNA杂交体模板中RNA被降解，从而保证第一链cDNA合成量和长度；与野生型酶及第一代SweScript RT I相比，第二代SweScript RT II的热稳定性和cDNA合成效率进一步提高，可在42-65℃范围内高效合成cDNA，并且最快5 min可完成逆转录反应，特别适用于复杂结构的RNA逆转录。 本试剂盒中同时提供gDNA Remover试剂，可在逆转录步骤前快速去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，提高实验结果的可信度，并可简化qPCR引物设计，无需跨外显子设计引物。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G3333-50 G3333-100 G3333-1 SweScript RT II Enzyme Mix a 50 μL 100 μL G3333-2 5×Reaction Buffer b 200 μL 400 μL G3333-3 Oligo (dT) 18 Primer (100 μM) 50 μL 100 μL G3333-4 Random Hexamer Primer (100 μM) 50 μL 100 μL G3333-5 gDNA Remover 50 μL 100 μL G3333-6 10×gDNA Remover Buffer 50 μL 100 μL G3333-7 Nuclease-Free Water 1 mL 1 mL 说明书 1份 1份 a：含有RNase In h ibitor ； b：含有dNTP Mixture和Mg 2+ 。 操作步骤 1. 基因组去除 (1) 将RNA模板，Nuclease-Free Water置于冰上融解备用； (2) 配制 基因组去除反应体系(推荐10 μL)： Component Volume 10×gDNA Remover Buffer 1 μL gDNA Remover 1 μL Total RNA/mRNA 0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg Nuclease-Free Water Add to 10 μL (3) 轻轻混匀并离心； (4) 37℃孵育2 min后置于冰上备用； 2. 第一链 cDNA合成 (1) 逆转录反应体系配制（推荐20 μL反应体系） ： Component Volume 基因组去除反应液 10 μL 5×Reaction Buffer 4 μL Oligo (dT) 18 Primer (100 μM) 1 μL or Random Hexamer Primer (100 μM) or 1 μL or Gene Specific Primer (2 μM) or 1 μL SweScript RT II Enzyme Mix 1 μL Nuclease Free Water Add to 20 μL 注：针对高 GC或复杂模板，可预先混合RNA模板、逆转录引物、无核酸酶水并在65℃保温5 min后，迅速置冰上冷却。然后再加入其他反应组分。 (2) 轻轻混匀并离心； (3) 逆转录程序设置 ： Temperature Time 25℃ a 5 min 55℃ b 5-15 min 85℃ 5 s a ：如选择使用Random Hexamer Primer，25℃孵育5 min后，再进行后续反应；如选择使用Oligo (dT) 18 Primer或Gene Specific Primer，可直接进行55℃反应； b:对于高GC或复杂模板，可将逆转录温度提高至65℃。 注意事项 1. 操作时请佩戴一次性手套，避免RNase污染。 2. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。 3. 如模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT) 18 Primer，与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。 4. 原核生物RNA逆转录请选用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer。 5. Random Hexamer Primer适用性较广，适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。 6. 如逆转录后续为qPCR实验，可将Oligo (dT) 18 Primer与Random Hexamer Primer混合使用，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。 7. 如后续qPCR引物跨外显子设计，基因组去除步骤可省略。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）