规格 SweScript One-Step RT-PCR Kit G3335-50 50 rxns G3335-100 100 rxns 产品简介 本产品采用一步RT-PCR的方法，以RNA为模板，使用基因特异引物，在同一体系中进行反转录与PCR扩增，反应中途不需要添加任何试剂，只需加入RNA模板、目的基因引物及水补足体系即可，能有效降低污染风险。本试剂盒包含SweScript One-Step RT Mix、2×One-Step PCR Master Mix，其中SweScript One-Step RT Mix包含SweScript逆转录酶及RNase Inhibitor。SweScript逆转录酶是通过体外进化筛选获得的突变体，其RNase H活性降低，具有强的延伸能力与热稳定性。2×One-Step PCR Master Mix包含DNA聚合酶、反应Buffer、dNTPs、Mg 2+ 、RT-PCR反应稳定剂等，DNA聚合酶具有校准功能，反应产物为平末端，该DNA聚合酶经改造优化，大大提高扩增性能与特异性。在精心优化的反应体系及条件下，本试剂盒One-Step RT-PCR扩增产物长达8 kb。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G333 5 -50 G333 5 -100 G3335-1 SweScript One-Step RT Mix 50 μL 100 μL G3335-2 2×One-Step PCR Master Mix 1 mL 2×1 mL G3335-3 Nuclease-Free Water 1 mL 1 mL 说明书 1份 操作步骤 (1) RT-PCR反应体系配制 ； Component Volume SweScript One-Step RT Mix 1 μL 2×One-Step PCR Master Mix 25 μL Gene-specific Forward Primer(10 μM) 2 μL Gene-specific Reverse Primer(10 μM) 2 μL Total RNA/mRNA 0.1 ng-1 μg / 10 pg-0.1 μg Nuclease-Free Water Add to 50 μL (2) 轻轻混匀并离心； (3) RT-PCR反应程序设置： T emperature Volume C ycles 50℃ a 15-30 min 1 98℃ 2 min 1 98℃ 15 s 35-40 50-65℃ b 20 s 72℃ 10 s/kb 72℃ 5 min 1 a：对于高GC或复杂模板，可将逆转录温度提高至55℃。 b：退火温度根据引物的Tm值进行调整，一般退火温度低于Tm值的3-5℃即可。 注意事项 1. 操作时请佩戴一次性手套，避免RNase污染。 2. 务必将SweScript One-Step RT Mix和2×One-Step PCR Master Mix置于冰上。 3. SweScript One-Step RT Mix含有高浓度甘油，使用前应短暂离心。 4. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。 5. 扩增不同的目的基因使用的RNA量不同，需要根据实际扩增情况调整模板用量。 6. 扩增5kb以上的目的基因建议使用试剂盒提取的RNA作为模板。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）