规格 miRNA第一链cDNA合成试剂盒(加尾法) G3334-25 25 rxns 产品简介 本试剂盒包括miRNA第一链cDNA合成的全部试剂。本产品以Total RNA或者miRNA为模板，采用Poly(A) Polymerase加A尾反应和逆转录反应同步进行的方法，高效合成多种miRNA第一链cDNA。试剂盒还提供后续扩增所需的U6内参（适用于人、大鼠、小鼠样本）正向扩增引物（U6 Forward PCR Primer）和通用反向扩增引物（Universal Reverse PCR Primer），合成的单链cDNA产物进行后续PCR或qPCR反应时只需要设计正向扩增引物即可。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G 3334-25 G3334-1 miRNA RT Enzyme Mix a 25 μL G3334-2 5×Reaction Buffer b 100 μL G3334-3 U6 Forward PCR Primer (10 μM) 100 μL G3334-4 Universal Reverse PCR Primer (10 μM) 100 μL G3334-5 Nuclease-Free Water 1 mL 说明书 1份 a： 含有RNase Inbi h itor以及 Poly(A) Polymerase ； b： 含有逆转录引物、dNTP Mixture、ATP和Mg 2+ 。 操作 步骤 1. 推荐反应体系配制（推荐冰上进行反应体系配制）； Component Volume 5×Reaction Buffer 4 μL miRNA RT Enzyme Mix 1 μL Total RNA/miRNA a x μL Nuclease-Free Water Add to 20 μL a：Total RNA推荐用量2 μg (不超过5 μg)，miRNA推荐用量200 ng。 2. 轻轻混匀并离心； 3. 加A尾与逆转录程序设置； Temperature Time 37℃ 60 min 85℃ 5 s 4. 获得的cDNA反应液推荐进行梯度稀释后再作为模板进行后续荧光定量PCR。 注意事项 1. 操作过程中注意避免RNase污染。 2. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。 3. 试剂盒中包含有定量PCR的通用下游引物，上游引物为miRNA特异引物，根据目的miRNA设计，一般情况上游引物为目的miRNA序列将U变为T。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）