规格 2×Multiplex Probe qPCR Master Mix with UDG（None ROX） G3347-01 1 mL G3347-05 5×1 mL G3347-15 15×1 mL 产品简介 本产品是基于探针法的2×荧光定量PCR预混液（None ROX），包含有热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和所必须的缓冲成分，可在同一反应管中同时进行多达四重的荧光定量PCR反应。预混液中不含校正染料，适用于无需ROX校正的设备。本产品添加蓝色非荧光染料，可避免加样错误，另外本产品中还包含有Uracil-DNA Glycosylase（UDG）以及专门优化的dUTP添加量，可防止模板残留污染，提高产品的特异性、灵敏度与精确性。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G33 4 7-01 G33 4 7-05 G33 4 7- 1 5 G3347-01 2×Multiplex Probe qPCR Master Mix with UDG（None ROX） 1 mL 5×1 mL 15×1 mL 说明书 1份 实验前准备 1. 实时荧光定量PCR仪。 2. 实验专用qPCR反应管或反应板。 3. qPCR引物和探针（参考引物、探针设计原则）。 操作步骤 1. 推荐PCR反应体系 Component 20 μL rxn Final Concentration 2×Multiplex Probe qPCR Master Mix with UDG（None ROX） 10 μL 1× Forward Primer（10 μM） a Variable 0.1-0.5 μM Reverse Primer（10 μM） a Variable 0.1-0.5 μM Probe（10 μM） a Variable 0.1-0.5 μM Template b Variable as required Nuclease-free Water Add to 20 μL a.通常引物和探针终浓度为0.2 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0. 1 - 0.5 μM范围内调整引物浓度。 b. 模板添加量因模板溶液中存在的靶基因的拷贝数不同而不同，进行梯度稀释研讨适当的模板添加量。在20 μL反应体系中模板DNA添加量最好在100 ng以下。 以RT-PCR反应的cDNA（RT反应液）为模板时，添加量不要超过PCR反应液总体积的10% 。 2. PCR反应程序（可根据机型适当调整） A. 两步法 B. 三步法 阶段 步骤 循环数 温度 时间 阶段 步骤 循环数 温度 时间 Stage 1 UDG孵育 1 50℃ 2 min Stage 1 UDG孵育 1 50℃ 2 min Stage 2 预变性 1 95℃ 30 sec Stage 2 预变性 1 95℃ 30 sec Stage 3 变性 40 95℃ 15 sec Stage 3 变性 40 95℃ 15 sec 退火/延伸 60℃ 30 sec a 退火 55-65℃ 10 sec 延伸 72℃ 30 sec a a. 需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。 注意事项 1. 预混液解冻后请轻轻地上下颠倒混匀，勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡，混匀后再使用。 2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。 3. 本制品中含有荧光染料，配制qPCR反应液时应避免强光照射。 4. 反应液的配制、分装请使用新的一次性吸头、尽量避免样品间的污染。 5. 避免反复冻融，解冻后尽量在一个月内使用完毕。 适配机型 ABI ： PikoRealTM Cycler; Bio-Rad ： CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex; IIIumina ： Eco QPCR; Cepheid ： SmartCycler®; Qiagen Corbett ： Rotor-Gene®系列; Roche ： LightCycler™系列; Takara ： Thermal Cycler Dice系列; Analytikjena ： qTOWER系列; 杭州博日 ： LineGene系列。 探针 / 引物 设计 原则 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）