规格 2×Fast Pfus PCR Master Mix G3305-1 1 mL G3305-5 5×1 mL 产品简介 本产品为即用型PCR预混液，含改造后的Pfu DNA polymerase、dNTPs和优化的PCR反应缓冲液，浓度为2×，适用于常规PCR，菌落PCR，复杂模板和高GC模板的PCR。PCR扩增时只需加入模板、引物和ddH2O，使Mix溶液的浓度为1×即可进行PCR反应。扩增能力强，扩增速度快，延伸速度可达5-15 s/kb，具有高保真性，高特异性，扩增产物为平末端。产品中已经添加了Loading Dye，扩增产物可直接用于琼脂糖凝胶电泳检测。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效，避免反复冻融。 组成 Component G 3305 - 1 G 3305 -5 2×Fast Pfus PCR Master Mix 1 mL 5×1 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 推荐PCR反应体系 ： Component 20 μL rxn 50 μL rxn Final Concentration Template a Variable Variable as required Forward Primer (10 μM) b 0.8 μL 2 μL 0.4 μM Reverse Primer (10 μM) b 0.8 μL 2 μL 0.4 μM 2×Fast Pfus PCR Master Mix 10 μL 25 μL 1× (DMSO,optional) c (0.6 μL) (1.5 μL) (3%) ddH 2 O Add to 20 μL Add to 50 μL a ：以质粒或噬菌体DNA为模板时，推荐添加量为10 ng-1 pg每50 μL体系；以基因组DNA为模板时，推荐添加量为250 ng-50 ng每50 μL体系；cDNA为模板时，推荐稀释2-100倍，添加量不超过总体系的10%。过量的模板容易导致非特异扩增，过少的模板容易导致PCR扩增效率低。 b ： 引物终浓度使用范围0.2-1.0 μ M，推荐引物浓度为0.4 μ M，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 c ：高GC模板可在反应体系中额外添加不超过10%的DMSO。 2. 推荐PCR扩增条件 ： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation a 98℃ 30 s-120 s 1 Denaturation 98℃ 5-10 s 25-35 Annealing b 50-72℃ 10-30 s Extension c 72℃ 5-15 s/kb Final extension 72℃ 5-10 min 1 Hold 4-16℃ Forever a ：预变性时间30 s适用于大多数常规模板，复杂模板可延长变性时间至2 min。 b ：对于复杂模板，含兼并引物的扩增，退火时间可延长至30 s。 c ：质粒等简单模板推荐延伸速度5-10 s/kb；常规基因组模板推荐延伸速度10-15 s/kb；复杂模板15-30 s/kb。 注意事项 1. 使用时，请彻底解冻并混匀，完全融解后可置于4℃稳定保存至少2周，避免反复冻融。 2. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。 （产品包装升级中，以实物为准。 ） 仅供科研用途，不可用于临床诊断！