规格 Multiplex PCR Kit G3303-50T 50 rxns G3303-100T 100 rxns 产品简介 本试剂盒中包含了5×即用型多重PCR预混液，可在一管反应中同时进行两种或多种靶标的检测。预混液中的较高保真性的DNA polymerase和创新性的缓冲条件再搭配独有的PCR Enhancer，有效提高了扩增产量和灵敏度，配制反应体系时只需加入引物、模板以及其他组分，可同时对多达20个靶标进行特异性扩增，扩增产物可直接进行电泳检测，无需额外添加Loading Dye。本产品可应用于科学研究、疾病诊断和基因分型等多个领域。 储存与运输 5×Multiplex PCR Master Mix冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；Multiplex PCR Enhancer冰袋（wet ice）运输，2-8℃避光保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G 3303-50T G 3303-100T G3303-1 5×Multiplex PCR Master Mix 0.5 mL 1 mL G3303-2 Multiplex PCR Enhancer 0.5 mL 1 mL 说明书 1 份 操作步骤 1. 推荐PCR反应体系 ： Component 5 0 μL rxn Final Concentration 5×Multiplex PCR Master Mix 10 μL 1× Multiplex PCR Enhancer 10 μL 1× Primer Mix a Variable 50~200 nM Template b Variable 1 ng~1 μg Nuclease-free Water Add to 50 μL a. 先分别用梯度PCR测试每对引物是否特异性扩增。多重PCR每条引物终浓度使用范围50~200 nM，可根据片段拷贝数在此范围内调整每条引物用量，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 b. 对于高复杂度的模板，例如人和动物基因组，推荐在50 μL体系中使用10 ng~1 μg的模板，对于低复杂度的模板，例如质粒，推荐在50 μL体系中使用1 ng~10 ng的模板。过量的模板容易导致非特异扩增，过少的模板容易导致PCR扩增效率低。 2. 推荐PCR扩增条件： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation 98℃ 2 min 1 Denaturation 98℃ 10 sec 35 Annealing a 50~70℃ 20 sec Extension b 72℃ 5~15 sec/kb Final extension 72℃ 5~10 min 1 Hold 4~16℃ Forever a. 可根据单对引物扩增时的通用退火温度进行多重扩增，如果扩增效果不佳，多重扩增时可设置梯度退火温度筛选最适退火温度 。 b. 质粒等简单模板推荐延伸速度5~10 s/kb；常规基因组模板推荐延伸速度10~15 s/kb。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 当扩增重数较多时，可尽量使用脱盐或HPLC纯化的引物。 3. 确保相邻的扩增子之间有足够的距离来区分。 4. 当扩增重数较多时，应配制较高浓度的琼脂糖凝胶用于电泳。 5. 使用5×Multiplex PCR Master Mix时，请彻底解冻并混匀。 6. 反应液的配制、分装请使用新的一次性无酶吸头、尽量避免样品间的污染。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）