规格 植物组织直接PCR试剂盒 G3313-01 100 rxns×20 μL体系 产品简介 本试剂盒是一款专为不同类型植物组织直接进行PCR所设计的产品，无需基因组DNA提取，只需简单处理可直接作为PCR扩增的模板，对于普通植物样本及多糖多酚植物样本均可兼容。 本试剂盒提供的2×Plant Direct PCR Master Mix专门针对植物组织样本直接扩增进行了优化，大大提高了扩增效率及抗抑制剂效果。此外，该试剂包含了PCR扩增除模板和引物外的所有组分，并添加了Loading Dye，扩增产物可直接点样电泳，大大简化了操作过程。该产品的简便性和强兼容性可用于快速转基因植株鉴定、植物基因分型等分子生物学实验。 储存与运输 2×Plant Direct PCR Master Mix冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂冰袋（wet ice）运输，2-8℃保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3313-01 G3313-1 2×Plant Direct PCR Master Mix 1 mL G3313-2 Lysis Buffer A 5 mL G3313-3 Lysis Buffer B 4 mL G3313-4 Direct PCR Enhancer 500 μL G3313-5 Nuclease-free Water 5 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 植物组织裂解后扩增 1）取5 mm 2 左右的植物叶片（推荐使用新鲜幼嫩的植物叶片）或5 mg的种子（对于坚硬种子可先用研磨仪或研钵研磨成粉末状）于Nuclease-free离心管中，加入50 μL Lysis Buffer A，用枪头或其他方式将植物样本捣碎（如：烟草叶片捣碎后溶液变为绿色；研磨成粉末的种子样本用枪头搅拌均匀），于室温下静置5 min。 2）加入40 μL Lysis Buffer B，涡旋振荡或吹打混匀后离心，将沉淀收集到管底，取上清，用Nuclease-free Water稀释5倍后作为模板备用。 3）推荐PCR反应体系： Component 2 0 μL rxn Final Concentration 2×Plant Direct PCR Master Mix 10 μL 1× Forward Primer (10 μM) a 0.8 μL 0.4 μM Reverse Primer (10 μM) a 0.8 μL 0.4 μM Template b Variable（≤4 μL） Nuclease-free Water Add to 20 μL a. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增 。 b. 一般20 μL 体系中加入2 μL稀释5倍后的裂解液时可获得较好的结果，可根据植物样本裂解的难易程度调整模板加入量，加入量不超过 4 μL 。 2. 植物叶片直接扩增（推荐PCR反应体系） a ： Component 5 0 μL rxn Final Concentration 2×Plant Direct PCR Master Mix 25 μL 1× Direct PCR Enhancer 10 μL Forward Primer (10 μM) b 2 μL 0.4 μM Reverse Primer (10 μM) b 2 μL 0.4 μM Template c 1 mm 2 叶片 Nuclease-free Water Add to 50 μL a. 植物叶片直接扩增仅适用于1 kb以下片段扩增 ，推荐使用新鲜幼嫩的植物叶片 。 b. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 c. 推荐50 μL体系中加入的叶片在1 mm 2 左右，通过打孔器或剪刀将叶片裁剪至1 mm 2 大小。 3. 推荐PCR扩增条件： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation a 98℃ 2 min~10 min 1 Denaturation 98℃ 10 sec 35 Annealing 50~65℃ 30 sec Extension b 72℃ 10~15 sec/kb Final extension 72℃ 5~10 min 1 Hold 4~16℃ Forever a. 植物组织裂解后扩增变性时间可缩短至2 min，植物叶片直接扩增变性时间推荐使用10 min 。 b. 常规基因组模板推荐延伸速度10~15 s/kb；复杂模板15~30 s/kb。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 尽量使用新鲜植物叶片，否则会影响扩增效率。 3. 如果采用裂解后扩增，样本的捣碎程度与扩增效率成正比。 4. 扩增1 kb以下的片段直接取1 mm 2 叶片作为模板，扩增1~2 kb的片段需裂解后取上清作为模板。 5. 2×Plant Direct PCR Master Mix避免反复冻融，解冻后尽量在一个月内使用完毕。 6. 反应液的配制、分装请使用新的一次性无酶吸头、尽量避免样品间的污染。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）