规格 血液直接PCR试剂盒 Blood Direct PCR Kit G3312-01 40 rxns G3312-05 200 rxns 产品简介 本试剂盒可以对全血样本进行直接PCR，无需进行DNA提取或样本制备，适用于新鲜血液、储存在4℃或冻存的含有 EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂 的 抗凝血以及Whatman903 ® 和FTA ® 商用卡上的干血渍，基因组和外源性靶DNA都可以有效扩增。 本试剂盒提供的2×Blood Direct PCR Master Mix经过一系列优化，搭配提供的Blood Direct PCR Enhancer，对血液直扩表现出极高抗抑制作用，扩增长度可达5 kb。此外，本产品中已经加入 Loading Dye ，PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳。本产品可广泛适用于高通量血液样本鉴定。 储存与运输 2×Blood Direct PCR Master Mix冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂冰袋（wet ice）运输，2-8℃保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3312-01 G3312-05 G3312-1 2×Blood Direct PCR Master Mix 1 mL 5×1 mL G3312-2 Blood Direct PCR Enhancer 500 μL 5×500 μL G3312-3 Nuclease-free Water 1 mL 5 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 推荐PCR反应体系： Component 5 0 μL rxn Final Concentration 2×Blood Direct PCR Master Mix 25 μL 1× Blood Direct PCR Enhancer 10 μL 1× Forward Primer (10 μM) a 2 μL 0.4 μM Reverse Primer (10 μM) a 2 μL 0.4 μM Template b Variable（≤10 μL） Nuclease-free Water Up to 50 μL a. 引物终浓度使用范围0.2~1.0 μM，推荐引物浓度为0.4 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 b. 血液加入量可以选择在1-20%之间，推荐5%。Whatman903 ® 和FTA ® 商用卡上的干血渍可使用打孔器或剪刀裁剪至1-2 mm 2 大小。注意：为达到最好的扩增效果，用移液器慢慢的将血液加入到反应体系中，让其沉淀到反应管底部，加入血液样本后，不能对反应体系进行混匀操作；血卡则可提前加入反应管中，再加入其余反应体系，以确保其浸入反应体系内。 2. 推荐PCR扩增条件： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation 98℃ 10 min 1 Denaturation 98℃ 10 sec 35 Annealing a 50~65℃ 20 sec Extension b 72℃ 15 ~ 30 sec/kb Final extension 72℃ 5~10 min 1 Hold 4~16℃ Forever a. 根据引物Tm值筛选出合适的退火温度 。 b. 扩增较短片段（≤2 kb）时延申时间为15 s/kb；扩增较长片段（2-5 kb）时延申时间为30 s/kb。 注意事项 1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。 2. 扩增结束后需要1000×g或者4000 rpm离心1-3 min，取上清进行电泳。 3. 对于长期存放的抗凝血，应尽量避免吸取到血液凝块。 4. 一般情况下全血浓度在5%时能取得良好扩增效果，若不能，可根据实际情况在1-20%之间调整血液浓度。 5. 对于像禽类或者其他有核红细胞可适量的降低血液量。 6. 反应液的配制、分装请使用新的一次性无酶吸头、尽量避免样品间的污染。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！