规格 Animal Tissue Direct PCR Kit G3310-100T 100 T G3310-500T 500 T 产品简介 本产品是一款专门针对动物组织直接PCR扩增的试剂盒，适用的样本包括新鲜或冷冻的哺乳动物内脏、指甲、毛发，斑马鱼，果蝇，培养的细胞等。试剂盒中独特的Animal Tissue Lysis Buffer A与Animal Tissue Lysis Buffer B结合，能够快速释放微量组织中的基因组DNA，无需基因组提取与纯化，可直接作为模板用于PCR扩增，操作简便，减少样品损失，极大缩短实验耗时。裂解产物可于-20℃长期储存。 试剂盒中配套的2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye)包含了除模板与引物外的所有组分，其中DNA Polymerase经改造后具有快速扩增和抗抑制剂的能力，PCR Mix中还含有多种反应增强剂，可进一步提高DNA Polymerase的扩增效率和特异性，可有效扩增3 kb以内的目的基因。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；Animal Tissue Lysis Buffer A，4℃保存；其余组分，-20℃保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3310-100 G3310-500 G3310-1 Animal Tissue Lysis Buffer A 5 mL 25 mL G3310-2 Animal Tissue Lysis Buffer B 200 µL 1 mL G3310-3 2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye) 1 mL 5×1 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 裂解样本释放基因组DNA a) 推荐样本用量 种类 样本量 动物内脏组织 ≤10 mg 毛发 ≤10 mg 指甲 ≤10 mg 动物细胞 ≤10 3 细胞 b) 裂解液配置： Component 裂解液(单 个 样本) Animal Tissue Lysis Buffer A a 50 µL Animal Tissue Lysis Buffer B 2 µL a. Animal Tissue Lysis Buffer A在低温条件下有白色沉淀析出，使用前37℃孵育2-3 min至白色沉淀消失。 c) 轻轻混匀，并瞬时离心； d) 根据推荐的样本用量称取样本置于1.5 mL EP管中，向其中加入需要单个样本所需裂解液，确保组织浸没于裂解液中，离心管置于50℃孵育10 min，然后95℃孵育3 min； e) 12,000 rpm离心1 min，将裂解后的残骸离心至管底，上清可直接作为PCR反应模板。可将上清转移至另一无菌EP管，置于-20℃长期保存。 2. 推荐PCR反应体系： Component 20 μL rxn Final Concentration Template a 1-2 μL as required Forward Primer (10 μM) b 1 μL 0.5 μM Reverse Primer (10 μM) b 1 μL 0.5 μM 2×Animal Tissue Direct PCR Mix (+Dye) 10 μL 1× ddH 2 O Add to 20 μL a. 模板用量不应超过反应体系的1/10 。 b. 引物终浓度使用范围0.5-1.0 μM，推荐引物浓度为0.5 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 3. 推荐PCR扩增条件： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation 98℃ 2 min 1 Denaturation 98℃ 15 s 35 Annealing 50-65℃ 20 s Extension 72℃ 10 s/kb Final extension 72℃ 5-10 min 1 Hold 4-16℃ Forever 注意事项 1. 试剂使用前请上下轻轻颠倒混匀，请勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡。 2. 冷冻组织应避免反复冻融，否则会导致基因组降解，影响PCR扩增效果。 3. Animal Tissue Lysis Buffer A与Animal Tissue Lysis Buffer B应现配现用，放置过久会影响裂解效果。 4. 较难裂解的样本，如指甲、毛发、外壳等，可将50℃裂解时间延长至20 min。 5. 裂解肠组织前，使用ddH 2 O清洗掉表面杂质，扩增效果更佳。 6. 裂解完成后，EP管中残存有未完全裂解的组织块，属于正常现象，不影响使用。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）