规格 Mouse Genotyping Kit G3311-100T 100 T G3311-500T 500 T 产品简介 本试剂盒包含小鼠尾巴、脚趾、耳朵快速裂解缓冲液和用于基因分型的PCR Mix，裂解产物无需进行基因组提取纯化，可直接作为模板用于PCR扩增，操作简便，对小鼠损伤小，只需要微量的组织样本即可达到高效的基因分型、基因敲除检测、转基因鉴定等。 本产品配套的2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye)包含了高抗抑制性能和快速扩增的DNA Polymerase、dNTPs以及优化的缓冲体系，具有直接扩增效率高和特异性强的特点，适用于2 kb以内的目的基因扩增。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；Mouse Genotyping Lysis Buffer A，4℃保存；其余组分-20℃保存；有效期12个月。 组成 Component Number Component G3311-100 G33 11 - 500 G3311-1 Mouse Genotyping Lysis Buffer A 4 mL 20 mL G3311-2 Mouse Genotyping Lysis Buffer B 1 mL 5 mL G3311-3 2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye) 1 mL 5×1 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 模板制备 a) 裂解液配制： Component 裂解液(单样本) Mouse Genotyping Lysis Buffer A a 40 µL Mouse Genotyping Lysis Buffer B 10 µL a. Mouse Genotyping Lysis Buffer A在低温条件下有白色沉淀析出，使用前37℃孵育2-3 min至白色沉淀消失 ， 不影响使用。 b) 轻轻混匀，并瞬时离心； c) 取1-3 mm的小鼠尾尖、2-3 mm直径（打孔）小鼠耳朵或2-3 mm脚趾（不含指甲的长度），将单样本裂解液加入到需裂解的样本中，50℃孵育10 min，95℃孵育3 min进行充分裂解； d) 12,000 rpm离心1 min，将裂解后的组织块离心至管底，上清可直接作为PCR反应模板。可将上清转移至另一无菌EP，置于-20℃长期保存。 2. 推荐PCR反应体系： Component 20 μL rxn Final Concentration Template a 1-2 μL as required Forward Primer (10 μM) b 1 μL 0.5 μM Reverse Primer (10 μM) b 1 μL 0.5 μM 2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye) 10 μL 1× ddH 2 O Add to 20 μL a. 模板用量不应超过反应体系的1/10 。 b. 引物终浓度使用范围0.5-1.0 μM，推荐引物浓度为0.5 μM，过少的引物可能会导致扩增产量低或无扩增，过量的引物可能会导致非特异扩增。 3. 推荐PCR扩增条件： Step Temperature Time Cycles Initial Denaturation 98℃ 2 min 1 Denaturation 98℃ 15 s 35 Annealing 50-65℃ 20 s Extension 72℃ 10 s/kb Final extension 72℃ 5-10 min 1 Hold 4-16℃ Forever 注意事项 1. 试剂使用前请上下轻轻颠倒混匀，请勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡。 2. 每次取样后将取样器侵入2%次氯酸钠溶液中反复冲洗，避免产生不同样本间的交叉污染。 3. 组织应尽量剪碎，以便裂解充分。 4. Mouse Genotyping Lysis Buffer A与Mouse Genotyping Lysis Buffer B应现配现用，混合后不宜放置太长时间，否则会影响裂解效果。 5. 组织块如果难以裂解，可将50℃裂解时间延长至20 min。 6. 裂解完成后，EP管中残存有未完全裂解的组织块，属于正常现象，不影响使用。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）