规格 Poly(A) Polymerase G3453-500U 500 U 产品简介 Poly(A) Polymerase，也称Poly(A)加尾酶，来源于大肠杆菌，以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端，以形成Poly(A)尾。Poly(A) Polymerase的加尾效率很高，可以在RNA的3'末端加入20~200个A碱基。主要用途：RNA末端标记、mRNA体外合成等。 来源： 来源于大肠杆菌由大肠杆菌重组表达。 酶活定义： 在37℃、pH 8.0条件下，10分钟内使1 nmol AMP掺入RNA末端所需的酶量定义为1个酶活单位。 纯度及浓度： SDS-PAGE检测纯度＞95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；5 U/μL。 失活或抑制： EDTA至浓度为10 nM或65℃加热20min失活。 酶存储buffer： 20 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%Glycerol，pH 7.5。 10хPAP Reaction buffer： 500 mM Tris-HCl，2.5 mM NaCl，100 mM MgCl 2 ，pH 8.0。 图1. 300 nt单链RNA底物加poly(A)尾效果图。20 μL反应体系，0.5 μg单链RNA (300 nt)，加入不同量Poly(A) RNA Polymerase，37℃孵育30 min，接着65℃孵育20 min终止反应。（由图中可以看出5 U Poly(A) RNA Polymerase 反应30 min可以在RNA的3'末端加尾约100 nt。RNA marker 1000货号 G3371 ，RNA marker 6000货号 G3372 ） 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。 组成 Component Number Component G 3453-500U G3453-1 Poly(A) Polymerase 100 μL G3453-2 10хPAP Reaction buffer 500 μL 说明书 1份 操作步骤 1. 参考下表配置反应体系： Component Volume Nuclease-Free water To 20 μL 10хPAP Reaction buffer 2 μL 10 mM ATP 2 μL RNase Inhibitor（40 U/μL） 0.5 μL RNA x μL Poly(A) Polymerase 1 μL 2. 将反应体系于37℃孵育30 min。加入EDTA至终浓度10 mM或65℃加热20 min以终止反应。（注：用于加尾反应的RNA应该进行适当纯化。） 注意事项 1. 涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。 2. 该酶也可以使用M-MuLV逆转录酶反应缓冲液进行反应，反应需要有Mg 2+ 等二价阳离子才能发挥活性。 3. RNA加的A尾长度受酶量、ATP浓度和反应时间等因素影响，不同的实验需要加A的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加A的长度，该酶在37℃反应30 min时可加约30个A碱基，1 h可加约100个A碱基。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 版本号：V1.0-202203 （产品包装升级中，以实物为准。 ）