规格 T4 RNA ligaseⅠ G3437-1000U 1000 U 产品简介 本产品T4 RNA ligaseⅠ，即T4 RNA连接酶Ⅰ，来源于T4噬菌体的RNA连接酶Ⅰ基因，由大肠杆菌重组表达。是一种ATP依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5‘磷酸末端与3’羟基末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA ligaseⅠ也被认为是一种单链RNA（ssRNA）连接酶，因为其对于单链RNA之间的连接效率最高，单链DNA与RNA之间的连接效率次之（DNA提供5‘磷酸基团，RNA提供3’羟基时），单链DNA之间的连接效率最低。 应用： ssRNA分子间连接；ssDNA与ssRNA分子间连接；ssRNA末端标记等。 来源： T4噬菌体的RNA连接酶Ⅰ基因，大肠杆菌重组表达。 酶活定义： 在37℃条件下，30 min内将1 nmol 5´-[ 32 P]rA 16 转变为耐受磷酸酶形式所需酶量为一个酶活单位。 失活或抑制： 65℃加热15 min可以使其失活。 纯度及浓度： SDS-PAGE检测纯度≥95%，无核酸酶残留，10 U/μL。 酶存储液： 10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.4。 1 0× RNA ligaseⅠ Buffer： 500 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl 2 , 10 mM DTT, pH 7.5。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。 组成 Component Number Component G 3437-1000U G3437-1 T4 RNA ligaseⅠ 100 μL G3437-2 10×RNA ligaseⅠBuffer 300 μL G3437-3 ATP (10 mM) 200 μL G3437-4 PEG8000 (50%, RNase free) 500 μL 说明书 1份 操作步骤 1. 对于单链RNA的环化连接反应，参考反应体系： Component Volume Nuclease-free Water To 20 μL ssRNA(20 μM) 0.5 μL 10×RNA ligaseⅠBuffer 2 μL ATP (1 mM) 1 μL T4 RNA ligaseⅠ 1 μL 注： 对于单链RNA或DNA分子间连接反应，可在反应体系中添加PEG8000（终浓度15%-25%），可以显著提高酶活性，不影响反应特异性；所有试剂、操作均要避免RNase污染；参考反应体系中RNA底物用量已经比较大，对于样品比较少的情况下，可以大幅度减少ssRNA的用量。 2. 将上述反应于37℃孵育30 min（为了使连接更充分，可适当延长反应时间）。反应条件可以根据实际情况进行调整，如果发现效果不理想可以尝试25℃孵育2 h或者16℃孵育16 h。 3. 反应完成后将反应体系于65℃孵育15 min，终止反应。视情况进行后续操作。 注意事项 1. 涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。 2. 可以使用RNase抑制剂防止RNA在反应中发生降解。可以加入终浓度1 U/μL的RNase抑制剂（ G3414 ）。 3. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）