规格 mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase G3455-2000U 2000 U 产品简介 mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase是来源于牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-甲基转移酶，由大肠杆菌重组表达，可以在RNA的5‘末端与帽结构相邻的第一个核苷酸的2’-O位置添加一个甲基，即形成Cap-1结构。Cap-1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase需要带有m7GpppN帽结构的RNA作为底物。主要用于体外mRNA合成。 来源：来源于牛痘病毒，由大肠杆菌重组表达。 酶活定义： 在37℃条件下，1 h内甲基化10 pmol的80 nt带帽RNA转录物所需的酶量定义为一个酶活单位。 纯度及浓度： SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；50 U/μL。 酶存储buffer： 20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1%（w/v）Triton X-100，pH 8.0。 10х Capping Buffer： 500 mM Tris-HCl，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT，pH 8.0。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。 组成 Component Number Component G 3455-2000U G3455-1 mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase 40 μL G3455-2 10х Capping Buffer 200 μL G3455-3 SAM（32 mM） 20 μL G3455-4 Nuclease-Free water 1 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 使用Nuclease-Free water，将适量（10 μg内）加帽的Cap 0 RNA稀释至16 μL，65℃加热5 min； 2. 将加热后的离心管于冰上放置5 min； 3. 按下表加入各个组分： Component Volume 处理后的变性Cap 0 RNA 16 μL 10х Capping Buffer 2 μL SAM（4 mM） 1 μL mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase 1 μL 4. 体系于37℃孵育1 h，RNA即可甲基化完成；（反应时间可以调整） 5. 若加帽好的RNA需要加上Poly（A）尾，可使用Poly(A) RNA Polymerase。 注意事项 1. 涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。 2. 反应热处理RNA，用于去除5‘末端的二级结构，若5’端结构复杂可以延长时间至10 min。 3. 若加帽效果不佳，可延长反应时间至2 h，以提高加帽效率。 4. SAM在pH 7-8、37℃条件下不稳定，需要在反应前新鲜配置。在反应开始前将32mM SAM稀释成4 mM的工作液，为避免SAM降解，整个过程需要置于冰上。 5. 建议适用RNase抑制剂防止RNA在反应中发生降解。可以加入终浓度1 U/μL的RNase抑制剂（ G3414 ）。 6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）