规格 Alkaline Phosphatase (Thermosensitive) G3400-1000U 1000 U 产品简介 本公司生产的Alkaline Phosphatase (Thermosensitive)，是一种来自南极微生物（TAB5）的、热不稳定的、经大肠杆菌重组表达纯化的碱性磷酸酶，可以非特异性催化去除DNA、RNA、dNTP、rNTP 5'或3'末端磷酸基团。Alkaline Phosphatase在分子生物学中广泛应用，例如去除DNA和RNA的磷酸化末端，以便后续用于探针的克隆或末端标记；在分子克隆实验中，去磷酸化可以阻止线性化质粒DNA的自我连接；它也可用于降解PCR反应中未结合的dNTP，用于后续测序或SNP分析。 特点： 快速去磷酸化；对热不稳定，80℃孵育2 min即可完全失活。 来源： 携带TAB5碱性磷酸酶基因的大肠杆菌菌株；其单体分子量约35 kDa； 酶活性定义： 在37℃孵育30 min将1 µg线性化的pUC19载体去磷酸化所需酶量定义为一个酶活单位。去磷酸化作用被定义为载体自连反应抑制率大于95%（通过大肠杆菌转化来衡量）。 失活或抑制： 80℃加热2 min可使Alkaline Phosphatase充分失活。EDTA等金属离子螯合剂对Alkaline Phosphatase有抑制作用。 纯度及浓度： SDS-PAGE检测纯度≥95%，5 U/μL。 酶储存缓冲液： 10 mM Tris-HCl，1 mM MgCl 2 ，0.01 mM ZnCl 2 ，50% Glycerol，pH 7.4。 10×ALP R eaction B uffer ： 500 mM Bis-Tris-HCl，10 mM MgCl 2 ，1 mM ZnCl 2 ，pH 6.0。 图1. G3400 Alkaline Phosphatase(Thermosensitive)对线性化质粒pUC19的去磷酸化效果。1：100 ng线性化质粒（单酶切）经T4 DNA Ligase（G3340）连接后转化感受态细胞；2：100 ng线性化质粒（单酶切）被Alkaline Phosphatase去磷酸化后再经T4 DNA Ligase连接后转化感受态细胞。由图中可以看到经过去磷酸化处理后单酶切载体不能发生自连。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G 3400-1000U G3400-1 Alkaline Phosphatase (Thermosensitive) 200 μL G3400-2 10×ALP Reaction Buffer 1 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 去磷酸化反应参考体系： Component Volume DNA or RNA sample 1-5 μg 10×ALP Reaction Buffer 2 μL Alkaline Phosphatase (Thermosensitive) 1 μL Nuclease Free Water To 20 μL 2. 按上述体系配置好之后，轻轻混匀，随后将液体离心至管底。 3. 37℃孵育15-30 min。如需获取更好的去磷酸化效果，可延长孵育时间至60 min。 4. 80℃加热2 min失活Alkaline phosphatase。 5. 按照后续实验需求可以使用多种方式（例如DNA纯化试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒，也可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀方法）对上述去磷酸化的DNA或RNA进行纯化。 注意事项 1. Alkaline Phosphatase与其它碱性磷酸酶相同，其酶活性需要有Zn 2+ 和Mg 2+ 的存在。ALP Reaction Buffer可以提供足够的Zn 2+ 和Mg 2+ 以保证酶的活性。 2. Alkaline Phosphatase在EDTA等金属离子螯合剂、无机磷酸盐及磷酸盐类似物存在时，其活性会被抑制。 3. Alkaline phosphatase在DTT、巯基乙醇等还原剂存在时，其活性会降低。 4. 在使用该产品时应将酶存放在冰盒内或冰上，使用完毕后应立即放置于-20℃保存。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ 版本号：V1.0-202105 （产品包装升级中，以实物为准。 ）