规格 ECL发光液组合装 G2161-200ML 普通ECL发光液：2×50 mL 灵敏ECL发光液：2×25 mL 超敏ECL发光液：2×25 mL 产品简介 本产品是由普通ECL发光液、灵敏ECL发光液、超敏ECL发光液三种不同灵敏度的ECL发光液组成。ECL发光液基本原理是以luminol为基础的化学发光；可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）发生反应而发光，通过X-光胶片曝光或其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测；检测极限分别为纳克级、皮克级、飞克级，可满足不同目的蛋白的曝光实验需求。灵敏以及超敏ECL发光液在样本浓度较低时依然能够检测信号，节省样本；同样低浓度抗体（一抗、二抗）孵育之后依然能够检测到信号，节省珍贵的抗体；灵敏ECL发光液相较于普通ECL发光液，信号值至少增强10倍；超敏ECL发光液相较于灵敏ECL发光液，信号值至少增强10倍。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G2161-200ML G2161-1 普通ECL发光液 普通ECL A液 50 mL G2161-2 普通ECL B液 50 mL G2161-3 灵敏ECL发光液 灵敏ECL A液 25 mL G2161-4 灵敏ECL B液 25 mL G2161-5 超敏ECL发光液 超敏ECL A液 25 mL G2161-6 超敏ECL B液 25 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 将相同灵敏度的ECL A液和ECL B液等体积混合制成相应灵敏度的ECL工作液，室温配制，现配现用； 2. Western Blot实验中PVDF膜（或NC膜）经二抗孵育后，多次洗涤，滤纸吸去多余液体；将膜放在两片洁净保鲜膜（或PE手套）中间，加入ECL工作液覆盖膜表面，此过程应小心完成，避免保鲜膜与PVDF膜（或NC膜）之间产生气泡； 3. 充分反应之后，用滤纸或吸水纸吸去多余的ECL工作液，随后进行压片检测或是荧光成像仪检测； 4. 压完的胶片用显影、定影试剂（推荐 G2019 ）进行显影和定影（若为荧光成像仪曝光忽略此步骤）；根据发光强度调整曝光条件。 注意事项 1. ECL A液和B液吸液过程中务必更换枪头，避免A液、B液交叉污染，致使活性成分失效。 2. 在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免外源蛋白质及金属离子污染。 3. 叠氮化钠会抑制HRP的活性，所有相关试剂应避免使用。 4. ECL工作液配置完成后请于一天内使用完，请勿留置到第二天，以免影响实验结果的准确性。 5. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖避光保存，以防失效；特别是B液，含有氧化剂，容易被还原而失效。 6. ECL化学发光试剂盒选择参照附表一，一抗及二抗推荐稀释比测试数据均来自自研抗体。 7. ECL化学发光检测常见问题及解决方案参照附表二。 8. ECL化学发光试剂盒A/B液均对人体有害，操作时务必小心，注意有效防护，避免直接接触人体或吸入呼吸道。 9. 本产品在低温下会有结晶析出，为正常情况，室温充分复温，涡旋促进溶解，可继续使用。 10. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 附表一： ECL 化学发光试剂盒选择参照表 产品名称 普通 ECL化学发光试剂盒 灵敏 ECL化学发光试剂盒 超敏 ECL化学发光试剂盒 目录号 G2014 G2074 G2020 检测极限 纳克级 皮克级 飞克级 一抗推荐稀释比 （1 mg/mL储存液） 1:1000-1:5000 1:4000-1:10000 1:10000-30000 二抗推荐稀释比 （1 mg/mL储存液） 1:1000-1:6000 1:3000-1:60000 1:6000-150000 特点及适用性 宽范围，适用性广 宽范围，适用性广，灵敏度高，中丰度蛋白，节省抗体 极高灵敏度，低丰度蛋白，抗体效价低或比较珍贵 附表二：ECL化学发光检测常见问题及解决方案 常见问题 可能原因 解决方法 高背景（背景较高或无特异性条带） 一抗、二抗稀释没有使用正确的缓冲液和浓度 适当降低稀释比，降低一抗、二抗的浓度 封闭液使用不正确或封闭不充分 磷酸化蛋白检测务必使用BSA或无蛋白封闭液封闭；膜孔径越小，封闭及洗脱时间应越长 一抗孵育不充分 适当延长孵育时间（4℃孵育过夜） 信号弱 一抗、二抗使用浓度偏低 提高一抗、二抗使用浓度 蛋白丰度低 增加上样体积 换用灵敏度更高的ECL化学发光试剂盒 荧光迅速猝灭，出现空心条带（鬼带） 目的条带荧光过强，快速消耗发光底物，底物消耗完之后就会出现反白的情况 降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量 膜上出现棕色或黄色条带 目标区域HRP酶含量过于丰富，产生大量自由基，致使HRP酶氧化失活 降低蛋白上样量或一抗、二抗的用量 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）