产品 简介 本试剂盒提供了简单而又快速的PAGE高分辨彩色(红色/绿色)凝胶配制试剂，能够同时制备下层胶(分离胶)和上层胶(浓缩胶、积成胶)，用户只需准备制胶设备，即可快速制备蛋白凝胶。具有不同颜色的上层胶使得蛋白点样孔清晰呈现，极大的提高了加样效率。该染料可在上层胶中稳定存在，不影响电泳或Western Blot等应用，凝胶可200 V恒压电泳，仅需30 min即可完成电泳过程，相较于传统的凝胶电泳体系耗时更短，分辨率更高。本试剂盒制备的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。 本方法配制时无需自行添加TEMED，仅需改良型促凝剂即可形成凝胶，大大减少了TEMED对人体和环境的危害。本产品为改良型Bis-Tris配方凝胶，需与配套电泳缓冲液使用，不能使用Tris-Glycine电泳缓冲液。具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。 系列产品货号及清单见下方列表。 本手册适用于PA GE高分辨彩色凝胶超快速配制试剂盒系列产品（G2066，G2067，G2068） 系列产品货号 货号 凝胶浓度 上层胶颜色 可制胶数量（大约） G2066-50T 8% 红色 60块0.75 mm胶， 或50块1.0 mm胶， 或30块1.5 mm胶 G2067-50T 10% 红色 G2068-50T 12% 红色 G2071-50T 8% 绿色 G2072-50T 10% 绿色 G2073-50T 12% 绿色 组成 组分名称 规格 BTT上层胶溶液A 50 mL BTT上层胶溶液B（红色或者绿色） 50 mL BTT下层胶溶液A 125 mL BTT下层胶溶液B 125 mL 改良型促凝剂 1 mL×5 25×Tris-MOPS SDS-PAGE电泳缓冲液 2×250 mL 说明书 1份 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，开封后于4℃保存，有效期3个月；25×Tris-MOPS SDS-PAGE电泳缓冲液室温保存，其他2-8℃避光保存，有效期12个月。 操作步骤 1. 根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的PAGE下层胶（分离胶），参照表格如下： 丙烯酰胺浓度 最佳分离范围 8% ≥35 kDa 10% 10-250 kDa 12% 10-100 kDa 2. 根据实验需求，等比例混合对应的溶液A和B，加入适量的改良型促凝剂，分别配制下层胶溶液、上层胶溶液。不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板为例，推荐配制体系如下表格： 配制组别 组分 0.75 mm玻璃板 1.0 mm玻璃板 1.5 mm玻璃板 下层胶溶液 BTT下层胶溶液A 2 mL 2.5 mL 4 mL BTT下层胶溶液B 2 mL 2.5 mL 4 mL 改良型促凝剂 40 μL 50 μL 80 μL 上层胶溶液 BTT上层胶溶液A 1 mL 1 mL 1.5 mL BTT上层胶溶液B 1 mL 1 mL 1.5 mL 改良型促凝剂 20 μL 20 μL 30 μL 3. 装配好凝胶制具，先加入配制好的下层胶溶液，然后使用蒸馏水或乙醇等溶液封住下层胶液面，待下层胶凝固充分（约15-30 min）后，弃去水或者乙醇，并用滤纸吸干残留的水或者乙醇，再加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用；也可在加入配制好的下层胶溶液后立即缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用； 4. 配制完成的凝胶如不能当天使用，可4℃保存1-2天后使用； 5. 电泳前将BTT电泳缓冲液（25×）稀释成1×电泳缓冲液即可（电泳缓冲液不建议重复使用超过2次）； 6. 电泳时可全程200 V恒压电泳，一般30分钟左右即可完成电泳。 注意事项 1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将A、B预混液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。 2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存三个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。 3. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。 4. 为了保证样本同时进入分离胶，直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。 5. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。 6. 如需进一步加快凝胶速度，可增加0.5倍改良型促凝剂使用量。 7. 温度对于胶的凝固时间影响较大，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。建议温度较低的情况下（15℃含以下）促凝剂添加量加倍。 8. 本公司同时提供其他彩色（黄色、蓝色）上层胶溶液，以区别不同样本不同凝胶电泳。 9. 如果有试剂结晶或凝固，不可继续使用。 10. 本试剂盒制成的凝胶不能兼容Tris-Glycine电泳缓冲体系，只能与套装内Tris-MOPS SDS-PAGE电泳缓冲液配套使用，另提供Tris-MOPS SDS-PAGE电泳缓冲液（25×）单品，见 G2050 。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）