规格 SDS-PAGE彩色(红色)凝胶配制试剂盒 (低分子量蛋白分离、Tricine体系) G2159-50T 50T 产品简介 本试剂盒提供了简单而又快速的SDS-PAGE彩色（红色）凝胶（低分子量蛋白分离，Tricine体系）配制试剂，能够同时制备下层胶、中层胶和上层胶，用户只需准备制胶设备，即可快速制备蛋白凝胶；同时，试剂盒含有红色染料，可自行配制红色的上层胶，使得蛋白点样孔清晰呈现，实现了加样过程的可视化，极大的提高了加样效率；该红色染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不会影响电泳和染色效果，电泳完成后也便于识别上层胶并切除，不影响后续Western Blot等实验；本试剂盒制备的凝胶专用于低分子量蛋白（≤20 kDa）的分离；配成之后上层胶浓度为4%，中下层胶、中层胶和上层胶层胶浓度为10%，下层胶浓度为16%。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，其他2-8℃避光保存，有效期12个月 。 组成 Component number Component G2159-50T G2159-1 上层胶溶液A 50 mL G2159-2 上层胶溶液B 50 mL G2159-3 中层胶溶液A 45 mL G2159-4 下层胶溶液A 90 mL G2159-5 中/下层胶溶液B 125 mL G5036-5ML 改良型促凝剂 1 mL×5 G2046 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上层胶红色染料(500×) 100 μL 说明书 1份 操作步骤 1. 根据实验需求，等比例混合溶液A和B，加入适量的改良型促凝剂（见下表），分别配制下层胶溶液、上层胶溶液；不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板（单块）为例，推荐配制体系如下表: 配制组别 组分 0.75 mm玻璃板 1.0 mm玻璃板 1.5 mm玻璃板 下层胶溶液 下层胶溶液A 1.2 mL 1.5 mL 2.4 mL 中/下层胶溶液B 1.2 mL 1.5 mL 2.4mL 改良型促凝剂 14 μL 18 μL 28 μL 中层胶溶液 中层胶溶液A 0.6 mL 0.75 mL 1.2 mL 中/下层胶溶液B 0.6 mL 0.75 mL 1.2mL 改良型促凝剂 7 μL 9 μL 14 μL 上层胶溶液 上层胶溶液A 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶溶液B 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶红色染料(500×) 4 μL 4 μL 6 μL 改良型促凝剂 12 μL 12 μL 18 μL 2. 装配好凝胶制具，先加入配制好的下层胶溶液，然后使用蒸馏水或乙醇等溶液封住下层胶液面，待下层胶凝固充分（约10-15min）后，弃去水或者乙醇，并用滤纸吸干残留的水或者乙醇； 3. 加入配制好的中层胶溶液，然后使用蒸馏水或乙醇等溶液封住中层胶液面，待中层胶凝固充分（约10-15min）后，弃去水或者乙醇，并用滤纸吸干残留的水或者乙醇； 4. 加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约10-15min）后即可使用；也可在加入配置好的中层胶溶液后立即缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约10-15min）后即可使用； 5. 推荐电泳条件： 使用Tricine SDS-PAGE Running Buffer (Powder)（ G2142 ）进行 冰浴 电泳：100 V，180-240 min。 注意事项 1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将A、B预混液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。 2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存六个月；若长期不用请放置于-20℃保存。 3. 推荐配制体系表仅适用于本公司自产的电泳仪，不同厂家的电泳仪所需添加的中层胶和下层胶的体积略有差异，请做适当调整，一般中层胶体积：下层胶体积=1:2，且需保证梳子插进去之后不会触碰到中层胶，一般梳齿底端距中层胶的距离2 cm左右为最佳。 4. 配制好的凝胶需当天使用，请勿保存在4℃一段时间后再使用。 5. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。 6. 为了保证样本同时进入分离胶，直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。 7. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。 8. 温度对于胶的凝固时间影响较大，为保证实验顺利进行，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。 9. 如需进一步加快凝胶速度，临配胶前可按需补充适量TEMED，同时增加0.5倍改良型促凝剂使用量。 10. 本公司同时提供其他彩色（绿色、黄色、蓝色）上层胶溶液，以区别不同样本不同凝胶电泳。 11. 如溶液A出现结晶或凝固，不可继续使用。 12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）