规格 SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 G2003-50T 50T 产品简介 本产品SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，包含凝胶制备所需的所有试剂，用户只需准备少量纯水及制胶设备（制胶底座、玻璃板、梳子等），按照说明书操作即可制得所需凝胶。本试剂盒可制备常规大小凝胶至少50块。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，其他2-8℃避光保存，有效期12个月。 组成 Component Number Component G 2003-50T G2003-1 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） 100 mL G2003-2 30% 丙烯酰胺（29:1） 100 mL G2003-3 1.0 M Tris-HCl（pH 6.8） 20 mL G2003-4 10% SDS 5mL G2003-5 PAGE凝胶催化剂 1 mL G5036-5ML 改良型促凝剂 1 mL×5 说明书 1份 使用方法 1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同，选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶，参照表格如下（2-8kDa大小蛋白建议使用Tricine 体系 制胶试剂盒 G2159） ： SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围（kDa） （Tris-Glycine电泳缓冲液， G2018 ） 最佳分离范围（kDa） （SWE快速高分辨电泳缓冲液， G2081 ） 6% 50-300 15-300 8% 30-130 10-250 10% 20-100 10-150 12% 10-60 8-100 15% <40 <60 2. 根据目标蛋白分子量大小，选取分离胶的浓度，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板（单块）为例，可参考下表配制胶液： 分离胶浓度 6% 8% 10% 12% 15% 玻璃板厚度（mm） 0.75 1.0 1.5 0.75 1.0 1.5 0.75 1.0 1.5 0.75 1.0 1.5 0.75 1.0 1.5 所需制胶液总体积（mL） * 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 H 2 O（mL） 2.12 3.18 4.24 1.85 2.78 3.7 1.59 2.38 3.17 1.32 1.98 2.64 0.92 1.38 1.84 30%丙烯酰胺（29:1）（mL） 0.8 1.2 1.6 1.07 1.6 2.14 1.33 2.0 2.67 1.6 2.4 3.2 2.0 3.0 4.0 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）（mL） 1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0 1.0 1.5 2.0 10% SDS（µL） 40 60 80 40 60 80 40 60 80 40 60 80 40 60 80 改良型促凝剂（µL） 24 36 48 24 36 48 24 36 48 24 36 48 24 36 48 PAGE凝胶催化剂（µL） 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 4.0 6.0 8.0 *制胶液总体积不包含PAGE凝胶催化剂的体积。 浓缩胶配制可参考下表： 浓缩胶浓度(%) 5% H 2 O/mL 1.93 2.95 3.86 5.79 30%丙烯酰胺（29:1）/mL 0.5 0.75 1.0 1.5 1.0M Tris-HCl（pH 6.8）/mL 0.5 0.75 1.0 1.5 10%SDS/μL 40 60 80 120 改良型促凝剂/μL 18 27 36 54 PAGE凝胶催化剂/μL 4.0 6.0 8.0 12.0 总体积 * /mL 3.0 4.5 6.0 9.0 * 总体积 不包含PAGE凝胶催化剂的体积。 3. 推荐电泳条件： a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液（ G2081 ）进行电泳：200-250 V恒压，25-35 min可完成电泳； b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液（ G2018 ）进行电泳：设置电压上层胶90 V，电泳约30 min（marker进入分离胶）；下层胶调整电压为150-180 V，约60-90 min(可根据实际情况调整)。 注意事项 1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将胶液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。 2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存六个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。 3. 小于10 kDa的蛋白分离建议使用Tricine胶，丙烯酰胺凝胶可能不足以分离。 4. 温度对于胶的凝固时间影响较大，为保证实验顺利进行，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。 5. 凝胶需要充分的凝固时间，建议胶制好充分静置确保凝胶彻底。 6. 当温度较低时，10%SDS溶液有结晶析出，于37℃复温融化后可继续使用。 7. 如需快速制胶试剂，可购买本公司其他产品，如SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒（ G2037 ），或超快速彩色凝胶配制试剂盒系列（ G2041 、 G2042 、 G2043 、 G2044 、 G2045 、 G2060 、 G2061 、 G2062 、 G2063 、 G2064 ），及高分辨超快速彩色凝胶配制试剂盒系列（ G2066 、 G2067 、 G2068 、 G2071 、 G2072 、 G2073 ），可满足不同实验需求。 8. 如果试剂G2003-2组分出现结晶或凝固，不可继续使用。 9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）