产品信息 本试剂盒提供了简单而快速的PAGE彩色(红色/绿色)凝胶配制试剂，能够同时制备下层胶（分离胶）和上层胶（浓缩胶、积成胶），用户只需准备制胶设备，即可快速制备蛋白凝胶。同时，试剂盒中上层胶溶液B中含有红色/绿色染料，使得蛋白点样孔清晰呈现，实现了加样过程的可视化，极大的提高了加样效率。该染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不会影响电泳和染色效果，电泳完成后也便于识别上层胶并切除，不影响后续Western Blot等实验。本试剂盒使用改良型促凝剂，凝胶配制时无需添加TEMED（有恶臭气味的有毒试剂）即可凝固。本试剂盒制备的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。 本试剂盒可制备常规尺寸的凝胶50块，具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄及大小有关。 系列产品货号及清单见下方列表。 本手册适用于彩色凝胶超快速配制试剂盒系列产品（G2041，G2042，G2043，G2044，G2045，G2060，G2061，G2062，G2063，G2064）。 系列产品货号 货号 凝胶浓度 上层胶 颜色 可制胶数量（大约） G2041-50T 6% 红色 60块0.75 mm胶， 或50块1.0 mm胶， 或30块1.5 mm胶 G2042-50T 8% 红色 G2043-50T 10% 红色 G2044-50T 12% 红色 G2045-50T 15% 红色 G2060-50T 6% 绿色 G2061-50T 8% 绿色 G2062-50T 10% 绿色 G2063-50T 12% 绿色 G2064-50T 15% 绿色 各试剂盒组分 组分名称 规格 上层胶溶液A 50 mL 上层胶溶液B（红色或者绿色） 50 mL 下层胶溶液A 125 mL 下层胶溶液B 125 mL 改良型促凝剂 1 mL×5 说明书 1份 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，开封后于4℃保存，有效期3个月；其他2-8℃避光保存，有效期12个月。 操作步骤 1. 根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的PAGE下层胶（分离胶），参照表格如下： PAGE分离胶浓度 最佳分离范围（kDa） （Tris-Glycine电泳缓冲液， G2018 ） 最佳分离范围（kDa） （SWE快速高分辨电泳缓冲液， G2081 ） 6% 50-300 15-300 8% 30-130 10-250 10% 20-100 10-150 12% 10-60 8-100 15% <40 <60 2. 根据实验需求，等比例混合溶液A和B，加入适量的改良型促凝剂，分别配制下层胶溶液、上层胶溶液。不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板为例，推荐配制体系如下表格： 配制组别 组分 0 . 75 mm 玻璃板 1.0 mm 玻璃板 1.5 mm 玻璃板 下层胶溶液 下层胶溶液A 2 mL 2.5 mL 4 mL 下层胶溶液B 2 mL 2.5 mL 4 mL 改良型促凝剂 24 μL 30 μL 48 μL 上层胶溶液 上层胶溶液A 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶溶液B(红或绿色) 1 mL 1 mL 1.5 mL 改良型促凝剂 12 μL 12 μL 18 μL 3. 装配好凝胶制具，先加入配制好的下层胶溶液，然后使用蒸馏水或乙醇等溶液封住下层胶液面，待下层胶凝固充分（约15-30 min）后，弃去水或者乙醇，并用滤纸吸干残留的水或者乙醇，再加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用；也可在加入配制好的下层胶溶液后立即缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液，插入梳子，待其凝固（约15-30 min）后即可使用； 4. 配制完成的凝胶如不能当天使用，可2-8℃保存1-2天。 5. 推荐电泳条件： a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液（ G2081 ）进行电泳：200-250 V，25-35 min； b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液（ G2018 ）进行电泳：上层胶90 V，约30 min（marker进入分离胶）；下层胶150-180 V，约60-90 min(可根据实际情况调整)。 注意事项 1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将A、B预混液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。 2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存三个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。 3. 上层胶溶液B长时间静置容易产生絮状沉淀，使用前请轻轻颠倒混匀。 4. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。 5. 为了保证样本同时进入分离胶，直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。 6. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。 7. 温度对于胶的凝固时间影响较大，为保证实验顺利进行，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。 8. 如需进一步加快凝胶速度，临配胶前可按需补充适量TEMED，同时增加0.5倍改良型促凝剂使用量。 9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 10. 凝胶时间与温度相关，建议温度较低的情况下（15℃含以下）促凝剂添加量加倍。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）