产品简介 本试剂盒提供了简单而又快速的一步法PAGE彩色凝胶超快速配制试剂盒，适用于Tris-甘氨酸电泳体系，可用于SDS-PAGE凝胶电泳，也可用非变性PAGE凝胶电泳。 与传统制胶试剂盒比较，有以下优点： 一步法制胶， 使用便捷 ， 快速高效 ：本试剂盒采用上层胶和下层胶分别设计成预混配方，只需加入改良型促凝剂即可灌胶。在灌完下层胶后无需液封压平胶面和等待凝胶，直接灌入上层胶即可。 无需添加TEMED，避免异味： 制胶过程中无需再添加TEMED，避免接触刺激性气味的试剂。 彩色上层胶，指示清晰 ：本试剂盒包含两种上层胶染料（红色/绿色），可用于制备不同颜色的上层胶，点样孔清晰可见，也可区分含不同样本的凝胶。该彩色染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不影响电泳和染色效果，电泳完成后也便于识别上层胶并切除，不影响后续Western Blot等实验。 具有优良的分离效果 ：电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，特别是小分子蛋白质条带更加清晰锐利。 一步法制胶试剂盒系列产品包含不同浓度的制胶试剂盒，包括6%、8%、10%、12%和15%，可用于不同分子量蛋白的分离。试剂盒内配套提供两种颜色的上层胶染料以及改良型促凝剂。可制备常规尺寸的凝胶约50块，具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。系列产品货号及清单见下方列表。 本手册适用于一步法制胶试剂盒系列产品（G2175，G2176，G2177，G2178，G2179）。 产品货号及组成 货号 浓度 可制胶数量（大约） 组分 组分名称 规格 保存条件 G2175 G2176 G2177 G2178 G2179 6% 8% 10% 12% 15% 60块0.75 mm胶， 或50块1.0 mm胶， 或30块1.5 mm胶 G2177- G2179 (1/2) 一步法上层胶溶液A 50 mL 2-8℃避光 一步法上层胶溶液B 50 mL 一步法下层胶溶液A 125 mL 一步法下层胶溶液B 125 mL 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上层胶红色染料(500×) 100 μL 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上层胶 绿 色染料(500×) 100 μL G5036 (2/2) 改良型促凝剂 5×1 mL -20℃保存 开封后于2-8℃保存 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，开封后于4℃保存，有效期3个月，其他2-8℃避光保存，有效期12个月。 操作步骤 1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同，选择合适浓度的PAGE下层胶，参照表格如下： PAGE分离胶浓度 最佳分离范围（kDa） （推荐Tris-Glycine电泳缓冲液， G2018 ） 最佳分离范围（kDa） （推荐SWE快速高分辨电泳缓冲液， G2081 ） 6% 50-300 15-300 8% 30-130 10-250 10% 20-100 5-150 12% 10-60 3-100 15% <40 <60 2. 按照以下步骤进行制胶。 注意，各步骤中具体试剂用量以及不同厚度的玻璃板所需凝胶液体积，参考下方表格。 （1）取等体积下层胶溶液A和下层胶溶液B，混匀。 （2）取等体积的上层胶溶液A和上层胶溶液B，然后准确吸取上层胶彩色染料，加入凝胶液中，混匀。 注意：上层胶染料容易沉降，使用前需充分混匀。另外，上层胶染料也可不加，则所得凝胶上层为无色。 （3）向（1）的下层胶混合液溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀。将混匀的凝胶液注入组装好的制胶玻璃板中，使液面和凹玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可。 注意：在加入改良型促凝剂后混匀时，动作需轻柔，防止剧烈混匀产生大量气泡。 下层胶溶液体积已包含适量冗余，请勿全部用于灌制下层胶，以免灌胶时上层胶高度不够 。 （4）向（2）的上层胶混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀。此时无需等待下层胶凝固，直接将混匀的上层胶溶液注入制胶玻璃板中，然后插入梳齿。注意： 在加入改良型促凝剂后混匀时，动作需轻柔，防止剧烈混匀产生大量气泡。且在注入上层胶时动作尽量轻柔，避免将上层胶溶液冲入下层胶。 （5）约15-30 min后凝胶凝固，拔去梳齿后即可进行电泳。 注意：凝胶凝固后上下层胶分界线若出现轻微不平，属正常现象，不影响后续电泳。 不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板（单块）为例，推荐配制体系如下表格： 备注：也可以事先将红色或者绿色100 μL 染料全部加入上层胶溶液B中预混使用。 配制组别 组分 0.75 mm玻璃板 1.0 mm玻璃板 1.5 mm玻璃板 下层胶溶液 下层胶溶液A 2 mL 2.5 mL 4 mL 下层胶溶液B 2 mL 2.5 mL 4 mL 改良型促凝剂 24 μL 30 μL 48 μL 上层胶溶液 上层胶溶液A 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶溶液B 1 mL 1 mL 1.5 mL 改良型促凝剂 12 μL 12 μL 18 μL 上层胶染料（红色或绿色） 4 μL 4 μL 6 μL 3. 推荐电泳条件： a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液（ G2081 ）进行电泳：150-250 V，25-50 min； b. 或使用Tris-Glycine电泳缓冲液（ G2018 ）进行电泳：上层胶90 V，约30 min（marker进入分离胶）；下层胶150-180 V，约60-90 min(可根据实际情况调整)。 注意事项 1. 灌注上层胶预混液时需要轻缓并左右平移，避免集中在一个位置灌注，以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度，灌注上层胶时需使用1mL移液器，切勿垂直灌入，将冲击力降到最低。 2. 上层胶红色（绿色）染料由于容易沉降，使用前请轻微吹打混匀。 3. 配制好的上/下层胶预混液若是温度偏低（刚从冰箱拿出）请恢复至室温再进行后续操作，避免因其温度低导致凝胶时间过长。 4. 制好的凝胶成品如不能当天使用，可4℃保存1-2天。 5. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵（AP）稳定性更好，使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存三个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。 6. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。 7. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。 8. 温度对于胶的凝固时间影响较大，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。建议温度较低的情况下（15℃含以下）促凝剂添加量加倍。 9. 如需进一步加快凝胶速度，临配胶前可按需补充适量TEMED，同时增加0.5倍改良型促凝剂使用量。 10. 如溶液A出现结晶或凝固，不可继续使用。 11. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）