一步法免染 PAGE 彩色凝胶超快速配制试剂盒 1、无需液封、无需等待下层胶凝固，可直接加入上层胶，15min制好胶； 2、无需染色脱色，直接紫外成像，5min观察WB电泳结果；高效完成WB电泳实验，获得更好WB实验结果 产品信息 本试剂盒提供了简单、快速的免染PAGE彩色(红色/绿色)凝胶配制试剂，能够无需染色，电泳后直接进行紫外激活，1-5min即可实现蛋白的可视化，适用于Tris-甘氨酸电泳体系，可用于 SDS-PAGE 凝胶电泳，也可用非变性 PAGE 凝胶电泳。 与传统制胶试剂盒比较，有以下优点： 无需染色，紫外成像： 本试剂盒不需要额外的染色与脱色步骤即可检测电泳蛋白条带，电泳完成后直接紫外曝光成像，且不会影响电泳及下游实验步骤 。 一步法制胶，使用便捷，快速高效： 本试剂盒采用上层胶和下层胶分别设计成预混配方，只需1;1混合AB液，然后加入改良型促凝剂即可灌胶。在灌完下层胶后无需液封和等待凝胶，直接灌入上层胶即可。 无需添加 TEMED，避免异味： 制胶过程中无需再添加 TEMED，避免接触刺激性气味的试剂。 彩色上层胶，指示清晰： 本试剂盒包含两种上层胶染料（红色/绿色），可用于制备不同颜色的上层胶，点样孔清晰可见。该彩色染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不影响电泳和染色效果，电泳完成后也便于识别上层胶并切除，不影响后续 Western Blot 等实验。 具有优良的分离效果： 电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，特别是小分子蛋白质条带更加清晰锐利。 本试剂盒可制备1.0mm尺寸的凝胶50块，具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及凝胶的大小有关。本手册适用于免染彩色凝胶超快速配制试剂盒系列产品（G2183-G2187）。 该系列产品货号及试剂盒成分 货号 凝胶浓度 可制胶数量（大约） 组分名称 规格 G2183-50T G2184-50T G2185-50T G2186-50T G2187-50T 6% 8% 10% 12% 15% 60块0.75mm胶， 或50块1.0mm胶， 或30块1.5mm胶 上层胶溶液A 50 mL 上层胶溶液B 50 mL 下层胶溶液A 125 mL 下层胶溶液B 125 mL 改良型促凝剂 1 mL×5 上层胶红色染料 (500×) 100 μL 上层胶绿色染料 (500×) 100 μL 说明书 1份 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；改良型促凝剂-20℃保存，其他2-8℃避光保存，有效期12个月。 操作步骤 1. 根据目的蛋白分子量大小选择合适浓度的PAGE下层胶（分离胶），参照表格如下： PAGE分离胶浓度 最佳分离范围（kDa） （Tris-Glycine电泳缓冲液， G2018 ） 最佳分离范围（kDa） （SWE快速高分辨电泳缓冲液， G2081 ） 6% 50-300 15-300 8% 30-130 10-250 10% 20-100 10-150 12% 10-60 8-100 15% <40 <60 2. 按照以下步骤进行制胶。 注意，各步骤中具体试剂用量以及不同厚度的玻璃板所需凝胶液体积，参考下方表格。 （1）取等体积下层胶溶液 A 和下层胶溶液 B，混匀。 （2）取等体积的上层胶溶液 A 和上层胶溶液 B，然后准确吸取上层胶彩色染料（1ml胶加入2ul上层胶染料），加入凝胶液中，混匀。 注意：上层胶染料容易沉降，使用前需充分混匀。另外，上层胶染料也可不加，则所得凝胶上层为无色 （3）向（1）的下层胶混合液溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀。将混匀的凝胶液注入组装好的制胶玻璃板中，使液面和凹玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5 cm 即可。 注意：在加入改良型促凝剂后混匀时，动作需轻柔，防止剧烈混匀产生大量气泡。下层胶溶液体积已包含适量冗余，请勿全部用于灌制下层胶，以免灌胶时上层胶高度不够。 （4）向（2）的上层胶混合溶液中加入改良型促凝剂，轻轻混匀。此时无需等待下层胶凝固，直接将混匀的上层胶溶液注入制胶玻璃板中，然后插入梳齿。 注意：在加入改良型促凝剂后混匀时，动作需轻柔，防止剧烈混匀产生大量气泡。且在注入上层胶时动作尽量轻柔，避免将上层胶溶液冲入下层胶。 （5）约 15-30 min 后凝胶凝固，拔去梳齿后即可进行电泳。 注意：凝胶凝固后上下层胶分界线若出现轻微不平，属正常现象，不影响后续 实验结果 。 不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格8.3 cm×7.3 cm 凝胶板（单块）为例，推荐配制体系如下表格： 备注：也可以事先将红色或者绿色100 μL 染料全部加入上层胶溶液B中预混使用。 配制组别 组分 0.75 mm玻璃板 1.0 mm玻璃板 1.5 mm玻璃板 下层胶溶液 下层胶溶液A 2 mL 2.5 mL 4 mL 下层胶溶液B 2 mL 2.5 mL 4 mL 改良型促凝剂 24 μL 30 μL 48 μL 上层胶溶液 上层胶溶液A 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶溶液B(红或绿色) 1 mL 1 mL 1.5 mL 上层胶红色/绿色染料(500×) 4 μL 4 μL 6 μL 改良型促凝剂 12 μL 12 μL 18 μL 3. 推荐电泳条件： 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液（ G2081 ）进行电泳：200-250 V，25-35 min； 使用Tris-Glycine电泳缓冲液（G2018）进行电泳：上层胶90 V，约30 min（marker进入分离胶）；下层胶 150-180 V，约 60-90 min(可根据实际情况调整)。 4. 免染胶成像：电泳结束后，即可将凝胶从玻璃板中取出后放入纯水中漂洗5s左右，然后放入成像仪中进行紫外曝光成像，或在紫外切胶台上直接观察，推荐波长310nm。 注意：荧光基团的紫外激发需要一定时间，一般 1~5 min，凝胶 即能 呈现清晰的蛋白条带 。 注意事项 1. 温差过大制胶过程产热可能会产生气泡，建议将A、B预混液配好后恢复至室温，再加改良型促凝剂进行灌胶，可有效避免凝胶过程中细小气泡的形成。 2. 改良型促凝剂使用时拿出一支，使用结束后于4℃保存，以便后续常规使用，可保存六个月；若长期不用请放置于-20℃保存，避免反复冻融。 3. 上层胶溶液B长时间静置容易产生絮状沉淀，使用前请轻轻颠倒混匀。 4. 预混液中存在单体丙烯酰胺，对人体有害，操作时请注意做好防护措施。 5. 为了保证样本同时进入分离胶，直接灌制上层胶时需缓慢均匀的加入配制好的上层胶溶液。 6. 加入改良型促凝剂之后尽快灌制凝胶，请勿长时间放置。 7. 温度对于胶的凝固时间影响较大，为保证实验顺利进行，一般温度越低，凝固时间越长，可适当增加改良型促凝剂用量；温度越高凝胶越快，可适当减少改良型促凝剂用量。建议低温情况（15℃及以下）促凝剂添加量加倍。 8. 如需进一步加快凝胶速度，临配胶前可按需补充适量TEMED，同时增加0.5倍改良型促凝剂使用量。 9. 紫外线的穿透力较弱，成像时胶与载物台之间不可有玻璃、挡板等阻隔物。 10. 建议使用310nm波长紫外光进行观察。 11. 如溶液A出现结晶或凝固，不可继续使用...