细胞浆与细胞核蛋白分离提取试剂盒，可以在70-90min内分离提取细胞和新鲜组织中，细胞浆蛋白、核蛋白。后续通过WB，EMSA等实验，研究不同组分在细胞中的定位。 搭配赛维尔研磨仪 低温型（ SWE-FP ）+高速低温离心机（ SLX-1024F ），以及Cocktail（ G2006-250UL ）+PMSF（ G2008-1ML ）+磷酸酶抑制剂（ G2007-1ML ）蛋白酶抑制剂，蛋白提取效果更好，WB实验结果好 规格 细胞核与细胞浆蛋白分离提取试剂盒 G3741-50T 50T 产品简介 本产品适用于细胞浆蛋白与核蛋白的分离提取，可用于研究不同组分在细胞中的定位。分离蛋白可用于后续SDS-PAGE，WB，EMSA等实验。 本试剂盒提供了一种简单，方便，快速的浆/核蛋白分类提取方法。能够在70-90min内完成细胞浆蛋白/核蛋白的分类提取。 本产品使用低渗溶液细胞浆蛋白抽提试剂溶胀及裂解细胞，离心即可获得细胞浆蛋白，后使用核蛋白抽提试剂A和B充分抽提细胞核蛋白。抽提获得的浆蛋白及核蛋白可以应用于SDS-PAGE，WB及EMSA等后续实验。 储存与运输 干冰（dry ice）运输； -20℃保存， 有效期12个月 。 组成 Component number Component G3741 - 50T G3741-1 细胞浆蛋白抽提试剂 15ml G3741-2 细胞核蛋白抽提试剂A 5ml G3741-3 细胞核蛋白抽提试剂B 250μl 说明书 1份 操作 说明 1. 对于 细胞 ： 1.1. 使用前将本产品室温解冻、复温后放置于冰上； 1.2. 根据使用体积配制工作液： 1.2.1.细胞浆蛋白抽提工作液：使用前在细胞浆蛋白抽提试剂（G3741-1）中加入Cocktail（ G2006-250UL ），PMSF（ G2008-1ML ）至终浓度为1mM。临用前添加避免失效。 1.2.2.细胞核蛋白抽提工作液：使用前在细胞核蛋白抽提试剂A（G3741-2）加入Cocktail（ G2006-250UL ），PMSF（ G2008-1ML ）至终浓度为1mM以及2%体积的细胞核蛋白抽提试剂B（G3741-3）。临用前添加避免失效。 1.3. 细胞溶胀及裂解：根据细胞沉淀量添加细胞浆蛋白抽提工作液，于4℃重悬细胞，裂解10min。裂解过程中涡旋2-3次。裂解液使用体积根据细胞沉淀体积确定，推荐10μl细胞沉淀加入100μl裂解液。例如10 ^6 总量的Hela沉淀量约为10μl，即加入细胞浆蛋白抽提工作液100μl进行裂解。 1.4. 4℃，2000g，5min条件下离心收集上清。吸尽上清，减少浆蛋白在核蛋白提取中的污染。 1.5. 对步骤1.4的上清在12000g，4℃，5min条件下离心再次收集上清即为浆蛋白。 1.6. 细胞核提取：向步骤1.4收集的沉淀中加入50-100μl细胞核蛋白抽提工作液。涡旋重悬，于4℃抽提20min，期间每3-4min涡旋10-15s。 1.7. 12000g，4℃，10min离心收集上清即为核蛋白。 2. 对于新鲜或冻存组织： 2.1. 使用前将本产品室温解冻、复温后放置于冰上； 2.2. 根据使用体积配制工作液： 2.2.1. 细胞浆蛋白抽提工作液：使用前在细胞浆蛋白抽提试剂加入Cocktail，PMSF至终浓度为1mM。临用前添加避免失效。 2.2.2. 细胞核蛋白抽提工作液：使用前在细胞核蛋白抽提试剂A加入Cocktail，PMSF至终浓度为1mM以及2%体积的细胞核蛋白抽提试剂B。临用前添加避免失效。 2.3. 把组织尽可能切成细小的碎片 ， 使用预冷PBS清洗1-2次。 每 5 0mg组织加入 1 mL 细胞浆蛋白抽提工作液，使用预冷 玻璃匀浆器 或低温组织研磨仪 充分匀浆。 玻璃匀浆器研磨30-60次，研磨仪设置参数60hz，30s，2次。研磨次数及研磨仪参数可根据组织类型进行调整。 2.4. 于 4℃ ， 20 00g离心5分钟。 收集上清。吸尽上清，减少浆蛋白在核蛋白提取中的污染 对上述步骤的上清在12000g，4℃，5min条件下离心再次收集上清即为浆蛋白。 2.5. 细胞核提取：向步骤2.4收集的沉淀加入50-100μl细胞核蛋白抽提工作液。涡旋重悬，于4℃裂解提取20min，每3-4min涡旋10-15s。 2.6. 12000g，4℃，10min离心收集上清即为核蛋白。 注意事项 1. 试剂-20℃保存，使用前室温解冻后需马上冰浴预冷。 2. 根据实验需求可在蛋白提取试剂中加入磷酸酶抑制剂。 3. 核蛋白抽提时尽量重悬沉淀以获得更好的抽提效果。 4. PMSF临用前添加，避免失效。 5. 本产品适用于新鲜或冻存组织，但冻存组织的分离提取效果会变差。 6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）