规格 Bradford法蛋白定量检测试剂盒 G2001-250ML 250 mL 产品简介 目前最常用的蛋白浓度定量检测方法有两种，即Bradford法和BCA法。Bradford法原理是基于考马斯亮蓝G250能与蛋白质快速结合。考马斯亮蓝G250在游离状态下最大光吸收在488 nm，其与蛋白质结合后在595 nm处有最大吸收值，并且光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量检测。本方法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1 mM，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM；但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS含量低于0.01%，Triton X-100含量低于0.05%，Tween-20，Tween-60，Tween-80等含量低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒（ G2026 ）。 本试剂盒操作简便快捷，灵敏度高，检测速度极快，可检测蛋白浓度范围为25-1000 μg/mL。 储存与运输 整套试剂可常温运输；蛋白标准品（BSA）2-8℃保存，有效期12个月。配制成蛋白标准溶液后需-20℃保存，并在6个月内使用。 组成 Component Number Component G2001-250ML G2001-1 考马斯亮蓝G250溶液 250 mL G2001-2 蛋白标准品（BSA） 25 mg G2001-3 蛋白标准配制液 1.5 mL 说明书 1份 操作步骤 1. 配制蛋白标准贮备液：取1 mL蛋白标准配制液加入到蛋白标准品（BSA）管中，将25 mg蛋白标准品完全溶解，即得到浓度为25 mg/mL的 蛋白标准贮备液 。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。 2. 配制蛋白标准工作液：取适量25 mg/mL 蛋白标准贮备液 ，用PBS或生理盐水（建议用与待测样本一致的缓冲液）稀释50倍，得到终浓度为0.5 mg/mL的 蛋白标准工作液 。注意稀释时按照10倍梯度方法稀释，确保稀释准确。 3. 绘制标准曲线（酶标仪法）：将蛋白标准工作液分别按0，1，2，4，8，12，16，20 μL加到96孔板中，然后用PBS或生理盐水依次加20，19，18，16，12，8，4，0 μL将上述梯度工作液补足到20 μL。得到蛋白浓度依次为0，25，50，100，200，300，400，500 μg/mL的梯度曲线。 4. 准备待测样品：将待测的蛋白样品进行适当稀释（可通过预实验检测，使样品蛋白浓度在标准曲线范围内，确保检测结果可信），按照每个样品20 μL的量加到96孔板中。 待测样品与蛋白标准品用相同溶液稀释 。 5. 检测：向以上每孔加入200 μL考马斯亮蓝G250溶液充分混匀（可将96孔板放在振荡器上振荡30 s），室温放置3-5 min后，以标准曲线0号做参比，在595 nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。 6. 计算：以标准曲线中梯度蛋白含量（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应孔中待测样品的蛋白浓度（μg/mL），再乘以样品稀释倍数即为待测样品实际蛋白浓度。 另：如用分光光度计测定，则在第3步中将梯度标准品反应体积改为1 mL。向7支洁净的玻璃试管或比色管中分别加入0，0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL蛋白标准工作液（浓度0.5 mg/mL），然后各管中依次分别加入PBS或生理盐水1.0，0.95，0.9，0.8，0.6，0.4，0.2，0 mL，将梯度工作液补足至1 mL，每管充分混匀，即得到蛋白浓度依次为0，25，50，100，200，300，400，500 μg/mL的梯度曲线。 待测蛋白样品做适当稀释后，加入到新的玻璃试管或比色管中，样品量为1 mL。 向上述标准曲线梯度管及样品管中各加入考马斯亮蓝G250溶液3 mL，充分混匀，室温静置3-5 min后用分光光度计进行比色检测。 检测时分光光度计波长设置595 nm，以标准曲线0号管为参比调零，检测标准曲线及待测样品。按照步骤6中的方法绘制标准曲线及计算待测样品中的蛋白浓度。 注意事项 1. 考马斯亮蓝G250溶液使用前需恢复至室温，并颠倒混匀，以免影响检测的灵敏度。 2. 在进行蛋白标准贮备液的配制时，需确保溶解充分。稀释配制蛋白标准工作液时建议10倍梯度稀释，不要一次稀释50倍，以免产生较大误差。 3. 为保证蛋白的精确定量，样品的提取和蛋白标准品的稀释配制最好选用相同的缓冲液，同保证两者检测条件一致。如果缓冲液本身就有较高的背景值，建议使用其他的方法测定。 4. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）