产品信息

产品描述

本公司生产的DNA topoisomerase I，是一种来源于牛痘病毒(vaccinia virus)的I型真核拓扑异构酶。该DNA Topoisomerase I具有解超螺旋的 (DNA Relaxing)活性，可以使双链共价闭合环状的正或负超螺旋DNA发生解超螺旋，从而可以形成含有较少的正或负超螺旋的双链环状的DNA分子。Vaccinia DNA Topoisomerase I也能使双链DNA形成绳结(knotting)或解开绳结(unknotting)，使互补的单链环状DNA成为双链环状DNA。

此外Vaccinia DNA Topoisomerase I能够特异性识别双链DNA中5’-… (C/T)CCTT…-3’序列，并可以在一条链上于5’-…(C/T)CCTT↓序列之后打开磷酸二酯键，而断裂磷酸二酯键释放的能量可以催化DNA切口处的3’磷酸基团与拓扑异构酶的第274位酪氨酸（Try）羟基形成共价酯键，也就形成了DNA与酶的共价复合物。同时形成的共价酯键又可以被切开的单链DNA的5’羟基攻击，在不需要ATP和DNA连接酶的情况下，可以恢复形成之前的磷酸二酯键，即重新将DNA连接起来，同时释放出Vaccinia DNA Topoisomerase I。

目前DNA Topoisomerase I (vaccinia virus)常被作为一种DNA重组连接的新型工具酶，用于DNA载体和重组片段的连接、缺刻修复、接头连接等。

特点： DNA解超螺旋、特异性打开连接磷酸二酯键。

来源：携带Vaccinia virus拓扑异构酶基因的大肠杆菌菌株；其分子量约37KDa；

酶活性定义：在37℃孵育30 min将1 µg的pUC19载体全部解旋所需酶量定义为一个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；10 U/μL。

失活或抑制：80℃加热20分钟可使DNA Topoisomerase I充分失活。

酶存储buffer：50 mM Tris-HCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1 M NaCl，0.1%Triton X-100，50%glycerol，pH 7.5。

10х Reaction buffer：500 mM Tris-acetate，1 M NaCl，25 mM MgCl₂，1 mM EDTA，pH 7.5。

储存与运输

低温运输；-20℃保存一年有效期；

组成

参考使用

1、参考反应体系：

2、按上述体系设置好之后，轻轻混匀，随后将液体离心至管底。

3、37℃ 孵育30分钟，反应完后置于冰上终止反应。

4、在进行琼脂糖凝胶电泳检测反应产物时需要使用不含溴化乙锭(EB)的琼脂糖凝胶，电泳结束后再进行核酸染色和凝胶成像观察。

注意事项

1，因为当凝胶中含有溴化乙锭时，溴化乙锭会结合到DNA的碱基之间并催化形成超螺旋。所以在琼脂糖凝胶电泳检测用DNA Topoisomerase I (vaccinia virus)处理的质粒产物时应使用不含溴化乙锭(EB)的凝胶进行电泳，在电泳完成后再使用溴化乙锭或其它合适的核酸染料进行凝胶的核酸染色检测。

2，在使用该产品时宜将酶存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后该立即放置于-20ºC保存。

3，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）