产品信息

产品简介

T4 DNA polymerase是来源于T4噬菌体的DNA聚合酶，由大肠杆菌重组表达，是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'-3'方向的DNA合成。其具有3'-5'的外切酶活性，不具有5'-3'的外切酶活性（活性比DNA聚合酶Klenow Fragment更强），是一种高保真的DNA聚合酶。T4 DNA Polymerase的3'-5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。基于这些特性，其主要用于DNA 5'或3'突出末端的平末端化、标记DNA探针合成、定点突变等。

来源：源于T4噬菌体由大肠杆菌重组表达。

酶活定义：在37℃、30 min内催化10 nmol dNTP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度＞95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；3 U/μL。

失活或抑制：75℃孵育20 min充分失活；EDTA会抑制活性。

酶存储buffer：100 mM KPO₄，1mM DTT，50% glycerol，pH 6.5。

10х Reaction Buffer：100mM Tris-HCl，500mM NaCl，100 mM MgCl₂，1 mg/mL BSA，pH 7.9。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

DNA末端平末端化

1. 模板、引物杂合链退火：将DNA模板与引物等摩尔混合，推荐终浓度为10 μM，90℃孵育1分钟，通过梯度降温至25℃退火形成杂交双链。

5‘或3’突出末端DNA。

2. 按照下表配置反应体系：

3. 配置好反应体系后，于12℃孵育15 min或25℃孵育5 min。

4. 反应完成后于75℃加热20 min灭活或者加入终浓度为10 mM的EDTA以终止反应。

注意事项

1. 由于该酶具有3‘-5’核酸外切酶活性，所以反应温度的提高、酶的量过多、没有加入dNTP或反应时间过长都可能造成DNA3‘末端碱基被切除而形成凹端。

2. 酶的取用都应放在冰盒内，使用完毕后立即存储于-20℃。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）