产品信息

产品简介

DNA polymerase I, Large (Klenow) Fragment，又称Klenow片段，是来源于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段，由大肠杆菌重组表达。保留了DNA聚合酶Ⅰ5'-3'的聚合酶活性和3'-5'的外切酶活性，缺少5'-3'的外切酶活性。基于这些特性，其主要用于双链DNA 5'或3'突出末端的平末端化、5‘末端标记、Sanger双脱氧法进行DNA测序、cDNA第二链的合成、定点突变等。

来源：来源于大肠杆菌，由大肠杆菌重组表达。

酶活定义：在37℃条件下，30 min内催化10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为一个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；2 U/μL。

失活或抑制：75℃加热20 min或加入适量EDTA均可导致酶失活。金属离子螯合剂、无机焦磷酸盐对酶有抑制作用。

酶存储buffer：25 mM Tris-HCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，pH 7.4。

10х Reaction buffer：100 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，100 mM MgCl₂，10 mM DTT，pH7.9。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

dsDNA 5‘突出末端补平：

1. 按照下表配置反应体系

2. 体系配置好后充分混匀，于37℃孵育10 min。然后75℃孵育10 min终止反应。

对于dsDNA 5‘突出末端的标记反应，只需将上述反应中dNTP Mix换成含有标记的dNTP Mix进行反应即可。

注意事项

1. 酶的取用都应放在冰盒内，使用完毕后立即存储于-20℃。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）