产品信息

产品简介

Bsu DNA polymerase, Large Fragment是来自于枯草芽孢杆菌的DNA聚合酶大片段，由大肠杆菌重组表达，具有5′→3′DNA聚合酶活性，不具有3′-5′和5′-3′核酸外切酶活性。Bsu DNA polymerase, Large Fragment还具有链置换活性，常常被用于重组酶聚合酶扩增（RPA）反应，其等温扩增的温度通常为37℃。

应用：RPA法等温扩增；RPA链置换DNA合成；随机引物法标记；cDNA第二条链合成；

来源：来源于枯草芽孢杆菌的DNA聚合酶大片段通过大肠杆菌重组表达。

酶活定义：在37℃条件下，30 min内将10 nmol dNTP掺入酸不溶沉淀物所需要的酶量定义为一个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；5 U/μL。

失活或抑制：75℃处理20 min即可失活。

酶存储缓冲液：25 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，pH 7.4。

10×Bsu Reaction Buffer：100 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，100 mM MgCl2，10 mM DTT，pH 7.9。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

等温扩增举例：

1. 将单链primer与DNA Template等摩尔数混合，推荐终浓度10 μM，95℃孵育2 min，然后梯度降温至25℃退火形成Primer/Template杂交双链。

2. 按照下表配制反应体系：

将上述反应体系于37℃孵育适当时间（实际使用中需要摸索孵育时间）。通过测试其延伸速率和常规DNA聚合酶类似，约1 kb/min。

3. 75℃孵育20 min以终止反应，可以进行琼脂糖凝胶电泳检测。

注意事项

1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存。

2. Bsu DNA polymerase, large Fragment因为缺乏3′-5′核酸外切酶活性，不适合用于生产平末端。

3. Bsu DNA polymerase, large Fragment能在25℃下保留约50%的活性，是Klenow片段（3′-5′ exo-）在这个温度下的两倍。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）