产品信息

产品简介

本产品phi29 DNA polymerase即phi29 DNA聚合酶，来源于嗜热脂肪芽孢杆菌噬菌体phi29，由大肠杆菌重组表达，其具有DNA链置换活性和很强的DNA持续合成能力（可实现长度超过70 kb的连续聚合延伸），有3‘-5’外切酶活性，具有很强的保真性，主要用于滚环等温扩增（RCA）、基因组扩增测序等。

来源：来源Bacillus subtilis噬菌体phi29 的DNA Polymerase基因，由大肠杆菌重组表达纯化。

酶活定义：在30℃条件下，10 min内将0.5 pmol dNTP掺入酸不溶沉淀物所需要的酶量定义为一个酶活单位。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%；内源性核酸残留量＜10^-1 pg/μL（qPCR检测）；10 U/μL。

失活或抑制：65℃加热10 min即可失活。

酶存储缓冲液：10 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Tween 20, 50% Glycerol, pH 7.4。

10×phi29 Reaction Buffer：200 mM Tris-HCl, 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20 mM MgSO4, 1% Triton X-100, pH 8.8。

图1. phi29 DNA Polymerase催化质粒（A）和293细胞基因组（B）DNA扩增效果图。反应体系为20 μL，A图模板为pUC19质粒，B图模板为293细胞基因组，引物都使用随机引物。整个体系于95℃孵育5 min，冰浴2 min后加入1μL 不同稀释比的phi29 DNA Polymerase（8、4、2、1倍），分别对应编号3、4、5、6，编号1中未加入phi29 DNA Polymerase，编号2中加入1 μL phi29 DNA Polymerase，但未加入模板，体系30℃孵育2 h。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

1. 参考下表配制反应体系：

2. 模板DNA预变性：将上述反应体系于95℃孵育5 min，迅速冰浴2 min。

3. 恒温扩增反应：在冷却的反应体系中加入1 μL phi29 DNA Polymerase，30℃孵育2-16 h。（一般情况下孵育2 h即可，如果希望获得更大量的产物，可延长时间至16 h）

4. 结束反应：65℃孵育10 min。

5. 扩增产物可以进行琼脂糖凝胶电泳检测。

注意事项

1. phi29 DNA Polymerase应用在滚环扩增（RCA）中可参照相关使用方法。

2. 对于酶制品操作应在冰浴上进行，避免酶在室温长时间放置而影响酶的活性。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

版本号：V1.0-202203

（产品包装升级中，以实物为准。）