产品信息

产品简介

本产品Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，简称TdT，中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶，是一种非模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3′羟基端加上dNTP，可以催化最短长度为3个核苷酸的寡核苷酸。TdT也可以在RNA的3'羟基端加上NTP，但对于RNA模板的催化活性要弱于DNA模板。该产品主要被使用在我们公司的Tunel Cell Apoptosis Detection Kit（货号：G1501、G1502、G1504、G1505、G1507）。本公司生产的TdT由进化筛选得到，相较于野生型酶活更高、底物谱更广。

应用：同聚物、杂聚物合成；线性双链DNA的3′羟基末端同聚物加尾；寡核苷酸或DNA 3′羟基末端标记；5′-RACE(快速扩增cDNA末端)；细胞凋亡的原位定位等。

来源：携带小牛胸腺基因的大肠杆菌菌株重组表达。

酶活定义：在配套反应缓冲液中，37℃，1 h内将1 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸3′末端所需的酶量定义为一个酶活单位。

失活或抑制：70℃加热10 min或者加入适量EDTA均可使其失活。金属离子螯合剂、较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子、磷酸根离子、肝素等都可以抑制其活性。

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%，无DNase、RNase；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；20 U/μL。

酶储存缓冲液：60 mM Potassium phosphate, 150 mM KCl, 1 mM DTT, 0.5% Triton X-100, 50% Glycerol, pH 7.2。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效。

组成

操作步骤

1. 该TdT可直接用于我们公司的Tunel Cell Apoptosis Detection Kit（货号：G1501、G1502、G1504、G1505、G1507）；也可以用于DNA末端标记、加尾反应。

2. DNA 3′末端标记：

   按上表设置反应体系后，轻轻混匀离心沉淀液体，将反应体系置于37℃孵育20 min。反应结束后，将体系置于70℃孵育20 min终止反应。（DNA 3′末端标记效率与3′末端类型有关，3′突出末端的标记效率要显著高于3′缩进末端或平末端的标记效率）

3. DNA末端加尾：

按上表设置反应体系后，轻轻混匀离心沉淀液体，将反应体系置于37℃孵育25 min。反应结束后，将体系置于70℃孵育20 min终止反应。（按上述反应条件，每个DNA 3′羟基末端可以加上110左右dA或dT，或加上25左右dC或dG）

注意事项

1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后应立即放置于-20℃保存。

2. 由于5×Reaction Buffer中含有CoCl₂，故其不能与下游应用兼容。需采用过柱离心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法纯化反应混合物，除去CoCl₂。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）