规格 Peptide-N-Glycosidase F（PNGase F） G3468-25000U 25000 U 产品简介 Peptide-N-Glycosidase F 简称PNGase F，来源于 Chryseobacterium miricola 的糖苷酶F，由大肠杆菌重组表达，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。主要用于去除蛋白质的N糖基化。 来源： 来源于 Chryseobacterium miricola ，大肠杆菌重组表达； 酶活定义： 在37℃条件下，1 h将10 μg变性的RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需的酶量定义为一个酶活单位； 纯度及浓度： SDS-PAGE检测纯度＞95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；500 U/μL； 失活或抑制： 75℃加热10 min即可失活； 酶存储buffer： 20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5； 10х Denaturing Buffer： 5% SDS，400 mM DTT； 10х Native Buffer： 400 mM sodium Phosphate，pH 7.5； 图1. 用PNGase F处理底物RNase B去糖基化效果图。底物RNase B变性处理后，取10 μg分别加入不同酶量的PNGase F（0、10、1、0.5、0.1 U），37℃孵育1 h后全部PAGE电泳检测。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。 组成 Component Number Component G 3468 G3468-1 Peptide-N-Glycosidase F（PNGase F） 50 μL G3468-2 10х Denaturing Buffer 1 mL G3468-3 10х Native Buffer 1 mL G3468-4 10%NP-40 200 μL 说明书 1份 操作步骤 1. 变性条件下蛋白质去糖基化： 在1-20 μg蛋白质样品中加入1 μL 10х Denaturing Buffer和dH 2 O至10 μL反应体系，体系在100℃中孵育10 min。待反应体系温度恢复常温后，再加入2 μL 10х Native Buffer、2 μL 10% NP-40、1 μL PNGase F和适量dH 2 O至20 μL反应体系，37℃孵育1 h。（注：PNGase F的活性会受到SDS抑制，因此在变性条件下必须加入NP-40） 2. 非变性条件下蛋白质去糖基化： 在1-20 μg蛋白质样品中加入2 μL 10х Native Buffer、2-5 μL PNGase F和适量dH 2 O至20 μL反应体系，37℃孵育4-24 h。（非变性条件下蛋白质去糖基化需要更长的反应时间或更多的酶） 注意事项 1. PNGase F的活性会收到SDS抑制，因此在变性条件下必须加入NP-40。 2. 评估蛋白质去糖基化的程度，最简单的方法是通过SDS-PAGE凝胶电泳检测。 3. 酶的取用都应放在冰盒内，使用完毕后立即存储于-20℃。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 产品仅供科研用途，不用于临床诊断！ （产品包装升级中，以实物为准。 ）