产品信息

产品简介

本产品包含小鼠单核巨噬细胞RAW264.7活细胞一瓶及其常规生长所需完全培养基、诱导分化完全培养基。破骨细胞为终末分化细胞，不能传代，光镜下可观察到破骨细胞胞体较大、多核、有伪足和突起等特征。本产品经多次优化，包含RAW264.7生长及分化所需所有组分。诱导完全培养基可在3-5天内诱导RAW264.7形成多核破骨细胞，并表达破骨细胞标志性酶-抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）。

储存与运输

常温（wet ice）运输；细胞收到后置于37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱静置培养；培养基2-8℃保存，

3个月有效期。

组成

操作步骤

1. 收到常温细胞后、75 %酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外表面，置于37 ℃，5 % CO2培养箱中静置培养2-4 h。

2. 显微镜下及时观察记录细胞生长状态，密度若超过80 %则可正常传代及接种处理。若细胞密度不到80 %则可预留6 mL左右原瓶培养基继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖。（RAW264.7正常传代密度不宜过于稀疏，传代时不可使用胰酶消化）。

3. 使用配套的完全培养基进行细胞培养，待状态良好时，按照10000 cells/孔的密度均匀接种于无菌48孔板，将孔板置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中，培养4-6 h或过夜后更换破骨诱导培养基。

4. 取破骨诱导培养基37℃提前预热，小心地将48孔板待诱导孔内完全培养基吸走，向孔内缓慢加入37℃预热过的诱导完全培养基500 μL，将孔板置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中开始诱导分化。（为避免培养基蒸发过快，可选择性将诱导孔周围孔内补齐无菌水或PBS。）

5. 进入分化周期后，每天观察细胞分化情况。首次加入分化液后建议维持2天再进行全换液操作，此后间隔1天进行全换液，直至低倍镜下可观察到较为明显的破骨细胞。使用本产品配套小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化，第3天开始可见较为明显多核破骨细胞；第4-5天破骨细胞范围增大，并伴随有极少部分早期形成的破骨细胞开始破碎；第6天大部分视野内破骨细胞开始碎裂。trap酶染色实验建议在出现较多破骨细胞当天立即进行，破骨细胞在完全成熟后超过24小时会逐渐破裂，细胞破裂后染色效果差。

6. TRAP染色（选做）：分化3-5天，可观测到明显的破骨细胞，推荐使用TRAP染色试剂盒（货号G1050）进行染色鉴定。

注意事项

1. 收到产品后请及时检查培养基外包装是否完好，是否损坏、漏液，镜下观察细胞有无微生物污染现象，如有上述情况立即拍照记录，及时联系我们。

2. 本产品不宜长时间放置于室温或较高温度的环境中。

3. 本产品保质期三个月，请于保质期内使用。

4. 请严格执行无菌操作，避免污染 。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）