产品信息

产品简介

3T3-L1细胞，是一种小鼠胚胎成纤维细胞（脂肪前体细胞）系，具备在体外分化为类脂肪细胞的能力，广泛应用于脂滴诱导等体外模型，以及肥胖和糖尿病等代谢性疾病的研究。

本产品是一款适用于3T3-L1细胞促贴壁、成脂诱导分化培养、脂滴检测一体试剂盒，包含增强细胞贴壁的明胶包被液，增强3T3-L1细胞向成脂细胞方向诱导分化能力的诱导培养基A液、诱导培养基B液，饱和油红O染液等四个组分。

储存与运输

冰袋运输，4℃保存，3个月有效期。

组成

操作步骤

一、实验前准备

1. 明胶包被液处理培养器皿（以12孔板为例）：无菌12孔板，在超净工作台中，加入1 mL 明胶包被液，不要产生气泡，轻轻摇晃使包被液充分覆盖皿底。将无菌12孔板放置在超净台内静置包被30分钟。包被结束，吸干净明胶后，可直接使用；亦可缠上封口膜置于4℃冰箱备用，从冰箱取出使用前请置于37℃培养箱回温20min。

二、细胞培养和诱导

1. 将生长状态良好的3T3-L1细胞以2×10^5个/mL的密度均匀接种1mL到12孔板中，将12孔板放回37℃，5% CO2培养箱中继续培养。

2. 细胞贴壁，延展生长至95-100%后，小心的将孔内完全培养基吸走，向12孔板中沿壁滴加1 mL诱导培养基A液，转移12孔板至培养箱中，诱导2天。

3. 2天后，吸取12孔板中诱导培养基，可保留少量诱导培养基。向12孔板中沿壁滴加1 mL诱导培养基B液，转移12孔板至培养箱中，继续诱导培养2天。

4. 重复操作步骤3，期间观察细胞，根据诱导形成的脂滴数量和大小，决定终止细胞诱导的时间，一般诱导7-14天即可观察到大量脂滴形成。

三、细胞染色和鉴定

1. 配制工作液：临用前，6份饱和油红O染液与4份蒸馏水充分混合均匀，4℃静置过夜，第二天后用定性滤纸过滤一次，在4℃放置24h再过滤第二次，得到油红O工作液。另外，需自备60%异丙醇。

2. 将诱导完成后的12孔板取出，吸去培养基，沿壁滴加入1mL PBS缓冲液（G4202）清洗2遍。弃去PBS缓冲液后，取1 mL通用型组织固定液（G1101），沿壁滴加入12孔板，覆盖培养器皿底面，室温固定20min。固定结束后，弃去固定液，沿壁滴加入1 mL PBS缓冲液清洗2遍。

3. 按照《饱和油红O染液》（G1015）说明书进行细胞染色。具体方法如下：向孔板内加入少量60%异丙醇覆盖细胞15-20 s，吸弃60%异丙醇，稍微晾干水分。向孔板内加入油红O工作液覆盖细胞，室温避光染色30 min，去除染色液。加入60%异丙醇快速分化3-5 s，纯水洗3次，每次5 min。加入PBS覆盖细胞后显微镜观察。

注意事项

1. 实验开始前确保细胞状态,尽可能使用早代次的细胞开始实验。

2. 细胞铺板需均匀，铺板不均匀可能导致分化不均匀、分化比例低、分化过程中细胞漂浮等问题。

3. 由于诱导时间较长和需要多次换液，为防止细胞脱落可以参考：使用明胶包被液处理培养板；细胞换液请提前37℃复温；换液时可保留少量原液作为缓冲；加液时，枪头沿壁逐滴加入；手法和力度要轻柔，对细胞的冲击最小，否则极易导致细胞卷边飘起；操作应迅速，尽量避免在超净台内操作时间过长。

4. 开始诱导时的密度可控制在90%~95%或者刚好长满，注意避免细胞过度饱和导致细胞卷边漂起或者状态不佳，这可能会影响后续的分化效果。

5. 为了你的健康，实验过程中请穿戴实验服、实验手套 。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）