产品信息

产品简介

本产品MC3T3-E1 Subclone 14 成骨诱导分化试剂盒，适用于MC3T3-E1 Subclone 14 细胞诱导成骨分化，产品已包含MC3T3-E1细胞成骨诱导生长所需的各种成分，无需添加其它成分，可直接用于MC3T3-E1 Subclone 14 细胞的成骨分化。

储存与运输

冰袋运输，2-8 ℃避光保存，有效期三个月。

组成

操作步骤

1. 细胞诱导

(1) 在无菌条件下取500 µL明胶包被液于6孔板中，摇晃均匀，将6孔板放置在超净台内30min，或放置在37 ℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中20 min后吸出明胶（不建议使用爬片，诱导后的细胞易卷边、飘起）。

(2) 取生长状况良好的MC3T3-E1 Subclone 14 按照8×10⁵cells/孔的细胞密度均匀接种于包被过的6孔板中（建议使用10代以内的细胞）。

(3) 细胞置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养。

(4) 待细胞汇合度达到85%时，小心地将孔内完全培养基吸走。

(5) 向孔内缓慢加入37℃预热过的2-3 mL成骨诱导完全培养基（注意：温差过大，细胞遇冷会导致收缩，飘起）。

(6) 诱导过程每隔2-3天换一次液，缓慢吸弃孔板中约2/3的培养液（留约1/3培养液），补入 2-3mL新鲜的成骨诱导完全培养基（加液过程轻柔缓慢，尽量缩短换液时间）。

(7) 诱导10-20 天左右，每天观察细胞状态。直至出现大小明显的钙结节，即可结束诱导（每次观察时间不超过10 min，拿取过程中切勿晃动）。

2. 茜素红染色

(1) 吸弃孔板内的培养基，加入恢复室温后的PBS清洗1-2遍（动作轻柔）。

(2) 加入500 µL 4%的多聚甲醛溶液均匀铺满孔板，室温下将细胞固定 30 min。

(3) 吸弃多聚甲醛溶液，纯水缓慢轻柔清洗 1-2 遍（由于PBS中含有的离子成分会使茜素红染色染色效果产生误差，本步骤需使用实验室专用纯水，推荐G4701）。

(4) 每孔加入500 µL茜素红染色液，室温染色 30 min（茜素红染液使用前摇匀）。

(5) 吸弃茜素红染色液，用实验室专用纯水清洗1-2次。

(6) 加入少量纯水即可在显微镜下拍照。镜下可见钙结节被茜素红染成红色。

注意事项

1. 收到培养基时，请及时检查外包装是否完好，是否损坏、漏液，如有请尽快联系。

2. 本产品不易将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。

3. 本产品保质期三个月，请于保质期内使用。

4. 请严格执行无菌操作，避免污染。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）